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DRG神经元细胞培养

楼主

yangyuyu2010

入门站友

1楼

这个帖子发布于5年零81天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。

问题已解决悬赏丁当:5

最近一直培养DRG神经元细胞，细胞状态总是不佳，细胞表面总有一些颗粒。试用不同的酶浓度总是避免不了，不知到为什么。

我的方法是取出DRG后，用0.35 U/mL of Liberase TM消化20min，然后用Liberase TL 0.25
U/mL+papain 30 U/mL消化15min。所用的缓冲溶液都是oxygenated complete saline
solution（mM)：
137 NaCl, 5.3 KCl, 1 MgCl2, 3 CaCl2, 25 sorbitol, and
10
HEPES, adjusted to pH 7.2 with NaOH。消化完用10%FBS DMEM/F12终止消化，并用1ml*头吹打后，贴壁培养。

恳求高人指点！！！！！

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2016-01-27 10:03 浏览 : 5216 回复 : 3

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jhduan-DXY

入门站友

2楼

满意答案

我的经验是DRG取出来后，放在冷的Pucks solution中 (in mM) 171 NaCl, 6.7 KCl, 1.6
Na2PO4, 0.5 KH2PO4, 6 D-glucose, pH 7.3.，将其中枢和外周端的轴突剪去后，转入含10ng/ml
papain的Puck's溶液中，37°C消化10-15min,离心去上清后加入含1 mg/ml collagenase 1A和 2.5
mg/ml dispase的F-12细胞培养液，轻轻摇匀后37°C消化10-15min，离心去上清后重新加入F-12细胞培养液，然后用不同口径的玻璃吸管轻轻吹打至无明显团块为止，最后将此悬液铺盘于培养皿中常规培养即可。

2016-01-27 11:42