• 论坛首页
  • 我的丁香客
  • 找人
    查找好友
  • 更多
    丁香园
    丁香通
    丁香人才
    丁香会议
    丁香搜索
    丁香医生
    丁香无线
    丁香导航
    丁当铺
    文献求助
    医药数据库
    丁香诊所
    来问医生
登录 注册

遗传发育

关注今日：0 | 主题：69213
论坛首页  >  遗传学与发育生物学讨论版
  • 发帖
    每发1个新帖
    可以获得0.5个丁当奖励
  • 回帖

分享到：

  • 微信

    微信扫一扫

  • 微博
  • 丁香客
  • 复制网址

（求助）我在做大熊猫发育生精过程的追踪，请教！ [精华]

  • 只看楼主
  • 页码直达：
  • 直达末页
楼主 Dapai
Dapai
常驻站友

  • 2
    积分
  • 1
    得票
  • 102
    丁当
  • 1楼
这个帖子发布于15年零269天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
我要跟踪大熊猫精子发生的过程，重点是大熊猫X、Y精子的分化与发育。我用显微切割仪挑出了单个的大熊猫精子，现在必须对精子作荧光原位杂交（FISH）鉴定。据我所查到的相关文献，对精子的FISH鉴定多以染色体上的端粒或着丝粒的高重复序列为荧光标记探针做的杂交，这在人和一些家畜上已有应用。但是我目前做的是大熊猫发育，因为大熊猫这个物种没有进行过大面积的基因组测序，所以我在NCBI、EMBL和DDBJ上找了很久，都没有找到能区分大熊猫X、Y精子的高重复序列。------所以请教一下同行战友，我是否要考虑换一个实验思路来做？或者最好能够在原思路上作一些改进，以减少课题经费支出。万分感谢！
  • 邀请讨论

    • 不知道邀请谁？试试他们

    换一换
2005-05-02 13:53 浏览 : 2178 回复 : 11
  • 投票
  • 收藏 2
  • 打赏
  • 引用
  • 分享

    • 微信扫一扫

    • 新浪微博
    • 丁香客
    • 复制网址
  • 举报
    • 广告宣传推广
    • 政治敏感、违法虚假信息
    • 恶意灌水、重复发帖
    • 违规侵权、站友争执
    • 附件异常、链接失效
    • 其他
  • • 年轻女性，腹痛伴血肌酐升高
evolution
evolution

丁香园荣誉版主

  • 362
    积分
  • 452
    得票
  • 512
    丁当
  • 2楼
高等哺乳动物基因组中以基因为单位的序列一般很保守，人和家畜中可以通用的检测序列在大熊猫中多半也可以用。如果端粒或着丝粒的高重复序列不能特异区别X、Y染色体，你可以选择X、Y上的功能基因作为检测对象，比如Y染色体你可以选择H-Y抗原序列、SRY基因序列等；X染色体你可以选择AR基因，XIST位点、磷酸化酶基因、还有其他遗传疾病致病位点序列等。
2005-05-02 14:46
  • 投票
  • 收藏 1
  • 打赏
  • 引用
  • 分享

    • 微信扫一扫

    • 新浪微博
    • 丁香客
    • 复制网址
  • 举报
    • 广告宣传推广
    • 政治敏感、违法虚假信息
    • 恶意灌水、重复发帖
    • 违规侵权、站友争执
    • 附件异常、链接失效
    • 其他
  • • 每天鼻塞流涕，一年四季“感冒”，这是为什么呢
楼主 Dapai
Dapai
常驻站友

  • 2
    积分
  • 1
    得票
  • 102
    丁当
  • 3楼
楼上此言差矣。荧光原位杂交（FISH）需要探针序列达到100,000bp以上才能通过二级信号放大才能在荧光显微镜下检测到荧光信号，我们通过多次的反复实验（例如用SRY等单拷贝基因），证明单拷贝基因根本没法做FISH，即使能做，也需要100,000bp以上的大片段单拷贝基因，这个探针是很难标记的；而且这么大的探针根本无法钻透精子膜。我们单位和亚特兰大动物园反复作了两年，花了近50W元RMB才得出以上的结论。------不过还是很感激楼上:)
2005-05-02 15:25
  • 投票
  • 收藏
  • 打赏
  • 引用
  • 分享

    • 微信扫一扫

    • 新浪微博
    • 丁香客
    • 复制网址
  • 举报
    • 广告宣传推广
    • 政治敏感、违法虚假信息
    • 恶意灌水、重复发帖
    • 违规侵权、站友争执
    • 附件异常、链接失效
    • 其他
  • • 综合医院全科门诊中乏力患者特征及就诊原因分析
ChrisWaken
ChrisWaken
丁香园准中级站友

  • 66
    积分
  • 14
    得票
  • 2249
    丁当
  • +2 积分
  • 4楼
我明白楼住的意思了。单拷贝序列确实很难做出来，如果能做出来的话，估计你可以发一篇IF>10的杂志。但如果要选取高重复序列的话，你也很难找到通用序列。鉴于你单位有显微切割仪，我建议你考虑做chromosome painting的FISH。FISH探针主要有3类：①区域特异或称位点特异的DNA片段，克隆在噬菌体（phage）、粘粒（cosmid）、细菌人工染色体（BAC）及酵母人工染色体（YAC）等载体中；②染色体特异重复序列探针；③染色体涂色（chromosome painting）探针，来自染色体特异性基因库。例如，Piumi等（2001）根据牛和山羊的近缘关系，从山羊细菌人工染色体（BAC）文库中筛选出能特异识别牛X染色体的含DVEPC076微卫星序列的BAC克隆，以之作为牛X染色体特异探针；同时，又根据牛Y染色体上特异的BRY4a高度重复序列设计出牛Y染色体特异探针。用这两种探针杂交牛精子均获得了成功。Rens等（2001）用流式细胞仪分别收集牛的X和Y染色体，并以之为模板，通过兼并寡核苷酸引物PCR（degenerate oligonucleotide primer PCR, DOP-PCR）制成牛整条X、Y染色体涂色探针（whole chromosome paintings，WCPs），对牛精子进行双色FISH检测获得成功。DOP-PCR是一种新近发展起来的通用引物扩增方法，其原理是在足够低的复性温度下（约30℃），只有引物3’端的6个特异性碱基与模板DNA特异结合，并且与3’端相接的中心兼并寡核苷酸序列碱基也结合到模板DNA上，理论上模板DNA每46个碱基（约4kb）即有一个引物特异结合位点，引物可按这样的频率与模板DNA结合，进行高密度的扩增，其扩增产物（即所有扩增出来的不同大小的DNA片段总和），从统计学意义上来说，能完整地代表原始DNA样品。因此，这种DOP-PCR适用于DNA模板量较少时（如通过流式细胞仪或显微切割技术收集到的染色体）的扩增。所以对于对基因组序列了解得还不深的许多哺乳动物来说，利用整条X、Y染色体涂色探针，对该物种精子做FISH检测，是较为理想的选择。
2005-05-02 15:32
  • 投票
  • 收藏
  • 打赏
  • 引用
  • 分享

    • 微信扫一扫

    • 新浪微博
    • 丁香客
    • 复制网址
  • 举报
    • 广告宣传推广
    • 政治敏感、违法虚假信息
    • 恶意灌水、重复发帖
    • 违规侵权、站友争执
    • 附件异常、链接失效
    • 其他
  • • 新冠疫苗十问十答，你想知道的都在这里

关闭提示

需要2个丁当

丁香园旗下网站

  • 丁香园
  • 用药助手
  • 丁香通
  • 文献求助
  • 丁香人才
  • 丁香医生
  • 丁香导航
  • 丁香会议
  • 手机丁香园
  • 医药数据库

关于丁香园

  • 关于我们
  • 丁香园标志
  • 友情链接
  • 联系我们
  • 加盟丁香园
  • 版权声明
  • 资格证书

官方链接

  • 丁香志
  • 丁香园新浪微博
引用回复