【求助】CDS区引物设计

大家好，我最近在设计CDS区巢式PCR内引物，在软件设计的过程中发现上下游引物的Tm和GC差挺大的，感觉很头疼，想问下是不是P出CDS区的引物设计只能卡在（上游）起始密码子和（下游）终止密码子？如果下游往后面移一点，会不会对之后的表达造成影响？迫切希望得到大家的指点，谢谢了！