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15个叮当求助：细胞毒性检测，测试降低毒性

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楼主

会飘的雨

常驻站友

1楼

这个帖子发布于5年零255天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。

问题已关闭悬赏丁当:20

看了好多文献，现在动手做实验，已知：细胞pc12细胞，抗氧化剂维生素c，对细胞造成毒性物质Ag纳米颗粒(AgNP)，文献上说，做细胞活性实验，细胞96孔板培养24小时(我知道怎么做)，然后加入抗氧化剂Vc 20mM(浓度)培养一小时，然后加入不同浓度毒性物质Ag24h，48h。
现在问题来了，文献没有说清楚
1 加入抗氧化剂Vc之前应该是要把96孔板中的完培给吸走吧。
2 NAC应该加多少ul(是100ul吗)
3 别人文章中说加毒性物质前加入抗氧化剂培养半小时，那么抗氧化剂加了半小时后，是否在加毒性物质Ag前需要吸走抗氧化剂，还是抗氧化剂与毒性物质一起培养24h 48h

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2015-05-10 14:05 来自 iPhone/iPad客户端浏览 : 2650 回复 : 12

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会飘的雨编辑于 2015-05-10 15:08

• 文献求助

楼主

会飘的雨

常驻站友

2楼

没人能回答我的问题吗

2015-05-11 11:27

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• 今上午写报告遇到的，颅脑MR，您能看出几处异常？据说工作中很罕见！

楼主

会飘的雨

常驻站友

6楼

caicai597
问题一抗氧化剂应该和培养液混合均匀之后加进去会比较好，这之前应该移除之前的旧培养液。?问题二我一般加每孔10微升的量，加90微升的培养液，也是提前配好了，再加进去。?问题三一般培养时间我会从后往前推，最先加要培养48小时的材料，个人认为应该要先移除有抗氧化剂的培养液再加入材料。不然你可以做下对比看看。

谢谢你的回答，我前天做了一组，结果不是很理想，cck-8发现读数在加了抗氧化剂Vc之后，比不加抗氧化剂，只加毒性物质Ag读数低，也就是说加了抗氧化剂，使得细胞的凋亡增多，这个结果肯定是不对的，现在我想了几个实验误区，请老哥帮我参考参考。
1. 细胞培养24小时，我发现细胞密度大概在50％左右，我又培养了24小时，发现细胞密度没多大变化，可能细胞量少，下次加大细胞量
2.培养48小时候，我吸走里面的旧完培，这个步骤应该没错
3.在第2步之前，我先配了抗氧化剂Vc(原始状态为固体颗粒)我是用纯水配的，我想是不是该用基培还是完培来配Vc制成溶液呢，因为我想以后不管原始Vc浓度是多大，因为纯水配的，溶液PH值跟基培不一样，这样以后不管调什么浓度都会使得其PH值不适合细胞生长
4.我在接种毒性物质之前，我吸走旧完培，加入了抗氧化剂溶液培养1h，这个溶液该是基培呢，还是完培呢
5.在接种毒性物质之前，我又把培养1h的抗氧化剂吸走了，然后加入配的Ag与抗氧化剂制成的混合液，这个应该是混合培养吧
6.我配的Ag溶液开始的原液也是用的纯水配的，这个是不是应该用基培配呢？我在配的所有的溶液，是不是都不该出现纯水，而改用PBS溶液或者基培，这样维持PH稳定呢
7.看老哥的回复，你说用10ul抗氧化剂+90ul培养液，这个培养液指基培还是完培，我是用10ul的浓度为20mM/L的抗氧化剂+90ul溶液来预培养1h，还是指的是这个一共100ul的混合液，的最终浓度在20mM的抗氧化剂，我看老哥的意思估计说的是后者

2015-05-12 21:38 来自 iPhone/iPad客户端

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• 一个读研期间执医四战四败的医学生内心独白

楼主

会飘的雨

常驻站友

7楼

zengyan1104
会飘的雨 ?看了好多文献，现在动手做实验，已知：细胞pc12细胞，抗氧化剂维生素c，对细胞造成毒性物质Ag纳米颗粒(AgNP)，文献...
问题一抗氧化剂应该和培养液混合均匀之后加进去会比较好，这之前应该移除之前的旧培养液。?问题二我一般加每孔10微升的量，加90微升的培养液，也是提前配好了，再加进去。?问题三一般培养时间我会从后往前推，最先加要培养小时的材料，个人认为应该要先移除有抗氧化剂的培养液再加入材料。不然你可以做下对比看看。
1. 要吸走。不过个人不同意直接将抗氧化剂和培养液混匀后加入的方法，毕竟存在一个问题要解释：抗氧合剂和培养液中各成分之间是否存在反应，可以做个预实验先明确这一点。?2. 配成100ul就行，如何配你自己可以个性化，然后写入你论文的实验方法部分就行了。?3.这个问题和问题1角度相同，可以先做个预实验除外你的抗氧化剂和毒性物质Ag之间的相互作用情况。如果两者有相互作用，就必须先吸走；反之则不强求。不然答辩时评委会质疑你的结论的。

?谢谢你的回答，我前天做了一组，结果不是很理想，cck-8发现读数在加了抗氧化剂Vc之后，比不加抗氧化剂，只加毒性物质Ag读数低，也就是说加了抗氧化剂，使得细胞的凋亡增多，这个结果肯定是不对的，现在我想了几个实验误区，请老哥帮我参考参考。?1. 细胞培养24小时，我发现细胞密度大概在50％左右，我又培养了24小时，发现细胞密度没多大变化，可能细胞量少，下次加大细胞量?2.培养48小时候，我吸走里面的旧完培，这个步骤应该没错?3.在第2步之前，我先配了抗氧化剂Vc(原始状态为固体颗粒)我是用纯水配的，我想是不是该用基培还是完培来配Vc制成溶液呢，因为我想以后不管原始Vc浓度是多大，因为纯水配的，溶液PH值跟基培不一样，这样以后不管调什么浓度都会使得其PH值不适合细胞生长?4.我在接种毒性物质之前，我吸走旧完培，加入了抗氧化剂溶液培养1h，这个溶液该是基培呢，还是完培呢?5.在接种毒性物质之前，我又把培养1h的抗氧化剂吸走了，然后加入配的Ag与抗氧化剂制成的混合液，这个应该是混合培养吧?6.我配的Ag溶液开始的原液也是用的纯水配的，这个是不是应该用基培配呢？我在配的所有的溶液，是不是都不该出现纯水，而改用PBS溶液或者基培，这样维持PH稳定呢?7.看老哥的回复，你说用10ul抗氧化剂+90ul培养液，这个培养液指基培还是完培，我是用10ul的浓度为20mM/L的抗氧化剂+90ul溶液来预培养1h，还是指的是这个一共100ul的混合液，的最终浓度在20mM的抗氧化剂，我看老哥的意思估计说的是后者
8.老哥的意思是看抗氧化剂与Ag之间有没有交叉反应，这个根据我看的文献前人混合过，所以应该可以混合

2015-05-12 21:42 来自 iPhone/iPad客户端

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