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细胞学与信号转导

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论坛首页  >  细胞生物学和信号转导版   >  细胞结构
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【实验求助】MTT细胞毒性试验加药组高浓度的OD值比低浓度的高，为什么？

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楼主 yl9123
yl9123
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这个帖子发布于5年零312天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
做的第一次预实验是药物组比对照孔（只加细胞不加药）的OD值都高，对照孔的OD值0.2左右，然后实验室的师兄师姐说对照孔的OD值太低了，建议我多养几天。于是我就把细胞种完96孔板(种了2个板）之后，一个养了2天，一个养了3天。养了2天的对照孔OD值到0.4左右，养了3天的OD值到0.6左右，养了2、3天的都能得出加药组的OD值比对照孔的低，这至少能说明我的药物是有抑制作用的（我要的也是抑制作用）。但是养了2天的加药组的高浓度到低浓度OD值却是由高到低。养了3天的OD值最低浓度的能得出比最高浓度的高，但是由高浓度到次低浓度的OD值却还是由高到低，我真不知道原因了，为什么会这样？
我养的是子宫内膜细胞（不是肿瘤细胞），种的是96孔板，4000/孔，每孔200ul,养2-3天后，去除培养基，加药200ul,作用24h后，去除药物，加入含MTT的培养液200ul,药物是由高浓度稀释为低浓度的。为了排除药物对OD值的影响，我甚至在加MTT前，用PBS清洗了96孔板，但到底是什么原因导致这种状况，次低浓度的孔OD值才0.07左右。是我种板没种均匀吗？我每加5个孔吹打一次的。请求各位前辈们能帮我找找原因，能解答我的疑惑，在此先谢过大家了！
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2015-04-27 12:58 浏览 : 10064 回复 : 13
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假设你的药物是真的可以抑制这个细胞并且剂量依赖的话，作如下可能性推测：
1、药物配置有问题；【这个可能性我觉得不高，但也是关键的一点】
2、每个孔细胞数目有问题；【铺完细胞后镜下观察下是否基本均匀一致】【强烈建议用12道连续移液器】
3、药物作用时间不够，效果没显示出来。
我们做药效一般是第1天铺细胞，第2天加药，药物作用3天，第五天测OD。仅供参考。
版主dachong99留言:
欢迎常来坐坐...
2015-04-28 16:19
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dachong99 编辑于 2015-04-28 17:49
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楼主 yl9123
yl9123
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首先先谢谢你-倾慕少艾。
药物作用时间应该是够了，我的对照孔0.6，加药组的OD值最高才0.2左右，所以我觉得加药时间应该够了！对于药物和种板，我打算再重新配置一次药物，配成一个最高浓度，然后再严格按照由高浓度稀释到低浓度，再种一次板，同时也调高种板细胞数，这样看能不能做出来我想要的结果。我之前种4000每孔，选择头一天种板，第二天加药，结果我的对照孔的OD值才0.2，太低了，所以我才多养了两天。
2015-04-28 23:00
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看这个意思，低浓度的药物就足够抑制生长了，为什么还要尝试更高的浓度呢，如果要看dose-dependent，也应该把浓度再降低吧
2015-04-30 16:24
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