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内分泌

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论坛首页  >  内分泌与代谢病讨论版   >  糖脂代谢
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【STZ大鼠不够成模,补救后的教训点滴】 [精华]

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楼主 miffyqx
miffyqx
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xfsjnox
个人认为:你打的这样就STZ并没有破坏足够多的胰岛β细胞,导致餐后血糖高而空腹正常。
原因分析如下:
1 大鼠性别:雄性较易成模。wistar用起来好像更加容易些。
2 你的STZ的配置方法有没有问题,柠檬酸缓冲液配置方案在丁香园里面搜索可以得到。
3 改用尾静脉注射是否效果更好些?

我认为可以再等待一周作OGTT看看,我们当初也是这样,假如还是不成模可以追加STZ的量,没有问题。
附件有个国外造模的protocol,可供参考


我用的是SD雄性大鼠
STZ的配置是有问题:当时没有在冰浴上做,而是在室温的条件下,花了40分钟,才注射完。
这样就应该是STZ并没有破坏足够多的胰岛β细胞,导致餐后血糖高而空腹正常。
我能不能把禁食时间减少为6-8小时?上次FBG做的是10小时。
2005-04-10 11:47
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我也在做糖尿病药理研究,根据我个人的经验,出现以上的情况还算是正常的,因为老鼠是活的东西,受到外界影响的程度很大的,包括自身的情绪。下面我结合自己的经历大略地说两句:
1)STZ失效问题
STZ制成干粉之后其活性可以保持很长时间,我们采用的Sigma公司产品其运输也是在常温下,只是到实验室之后才放进-30度冰箱,也没有发现什么失效问题,而且即使是有一些失效(我的师兄遇到过)也只是造出的糖尿病模型血糖很不整齐而已。所以一般情况下,STZ冻干粉失效的几率不是很大。
再有是STZ注射的问题。不知道楼主采用的是什么方法,腹腔还是静脉?因为这涉及一个操作时间问题,STZ的水溶液在中性常温下非常容易变成气体,因此在做实验的时候都要配制成pH=4.0左右的溶液并且在冰上操作。持续时间据我个人的经验是不要超过5-10分钟,否则容易失效。
另一个方面,STZ融解完全也是一个很重要的问题,在配制溶液时,因为过于注意快速进行完操作而不能等STZ完全融解则会产生注射剂量上的差异。在一次试验中,我们分三次注射,结果在最初注射的4-5只大鼠均没有成功,最后究其原因发现是由于STZ没有充分融解所致。
2)大鼠饲养问题
大鼠其实是一种很脆弱的动物,极易受到外界因素的影响,比如温度、湿度、光照和噪音等。温度、湿度以及光照大家一般都很注意,现在实验室条件也比较好,可以很好地控制,但噪音的影响可能就不一定很注意了。我这里所说的噪音并不是指大家平常所述的嘈杂和尖利的声音,这些我们自己都受不了,所以绝对不会给大鼠的,我说的是我们听不到或者认为不严重的问题。首先要注意,大鼠的听力范围是人的2倍,所以很多人们无法听到的次声波和超声波,对大鼠都会产生很大的影响。我们实验室人比较多,动物房经常有人走动,一次因为大鼠过多没有足够的架子放置,所以我一疏忽将几笼鼠直接放在了地上,结果在测量血糖时,放在架子上的90%成功,而在地上的一只也没有。
3)验证造模成功的时间间隔问题
根据《药理试验方法学》,声称注射STZ 3天之后即可测量血糖验证模型成功率。但在我们的试验中发现,注射STZ之后,动物的血糖总有波动,忽高忽低,一直要到7天左右才能够达到比较稳定。所以我们一般在注射STZ 6天后测量血糖,而且这样做还有一个优点就是模型对照组的血糖会一直很稳定,历次测量的波动均不会超过3mmol/L,给试验结果的分析带来很大的方便。
4)动物禁食问题
根据<方法学>,大鼠禁食的时间一般不要超过6-8小时,所以我们总是在晚上12点禁食,早晨8点采血。因为没有做过其他的禁食办法,所以不好讨论以上各位的方法。
5)大鼠的正常血糖范围
这从许多《实验动物学》中均能够查到,我现在手头没有带书,记得不是很清楚,但大体上和人相当,血糖范围是大约4-6mmol/L。
以上只是我个人的一点浅薄经验,只当抛砖引玉,请大家继续讨论。
2005-04-10 12:38
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xfsjnox
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内分泌科
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见
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=92&id=1044967&sty=3&keywords=%B2%D9%D7%F7%B2%BB%CA%C7%BA%DC%CA%EC%C1%B7

0.1mol/l柠檬酸缓冲液的配制如下:
0.1mol/l柠檬酸母液:称2.10g柠檬酸(分子量210.14)溶于100ml双蒸水
0.1mol/l柠檬酸三钠母液:称2.94g柠檬酸三钠(分子量294.10)溶于100ml双蒸水
0.1mol/l柠檬酸缓冲液(PH4.5)是由0.1mol/l柠檬酸母液和0.1mol/l柠檬酸三钠母液混合配制的,大体比例是:1:1.32

注意配置好的STZ溶液放在冰袋里面保存!尽快用完,剩下的也不能用了。STZ毒性不小,操作者需注意自身的劳动保护

给你的附件中的protocol中提示国外禁食时间很短,缩短时间应该可以,但是听说(我没有办法证实)禁食时间长点成模效果较好些。
模型没有成功,可以追加STZ ,上面的protocol中提到。
2005-04-10 12:49
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winner79
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看到大家的回帖,的确很有启发,我最初的回贴可能不够全面,这里有些问题的确有点奇特。看你的方法应该是大剂量一次注射造1型糖尿病模型,所以最好不要再注射一次了,很可能造成大批死亡。而且这样即使血糖上去了,也很难讲造模成功了。我在试验中用30毫克的量尾静脉注射,配合高脂造2型都有死亡的,你的方法没死亡的不大正常吧?还要大鼠的抵抗力比人要好,有很大一部分即使出现三多,并不代表造模成功,2周之后可能完全恢复。此时糖耐量肯定已经异常了。
2005-04-10 13:28
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