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内分泌

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论坛首页  >  内分泌与代谢病讨论版   >  糖脂代谢
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【STZ大鼠不够成模，补救后的教训点滴】 [精华]

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楼主 miffyqx
miffyqx
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xfsjnox
个人认为：你打的这样就STZ并没有破坏足够多的胰岛β细胞，导致餐后血糖高而空腹正常。
原因分析如下：
1 大鼠性别：雄性较易成模。wistar用起来好像更加容易些。
2 你的STZ的配置方法有没有问题，柠檬酸缓冲液配置方案在丁香园里面搜索可以得到。
3 改用尾静脉注射是否效果更好些？

我认为可以再等待一周作OGTT看看，我们当初也是这样，假如还是不成模可以追加STZ的量，没有问题。
附件有个国外造模的protocol，可供参考


我用的是SD雄性大鼠
STZ的配置是有问题：当时没有在冰浴上做，而是在室温的条件下，花了40分钟，才注射完。
这样就应该是STZ并没有破坏足够多的胰岛β细胞，导致餐后血糖高而空腹正常。
我能不能把禁食时间减少为6-8小时？上次FBG做的是10小时。
2005-04-10 11:47
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我也在做糖尿病药理研究，根据我个人的经验，出现以上的情况还算是正常的，因为老鼠是活的东西，受到外界影响的程度很大的，包括自身的情绪。下面我结合自己的经历大略地说两句：
1）STZ失效问题
STZ制成干粉之后其活性可以保持很长时间，我们采用的Sigma公司产品其运输也是在常温下，只是到实验室之后才放进-30度冰箱，也没有发现什么失效问题，而且即使是有一些失效（我的师兄遇到过）也只是造出的糖尿病模型血糖很不整齐而已。所以一般情况下，STZ冻干粉失效的几率不是很大。
再有是STZ注射的问题。不知道楼主采用的是什么方法，腹腔还是静脉？因为这涉及一个操作时间问题，STZ的水溶液在中性常温下非常容易变成气体，因此在做实验的时候都要配制成pH＝4.0左右的溶液并且在冰上操作。持续时间据我个人的经验是不要超过5-10分钟，否则容易失效。
另一个方面，STZ融解完全也是一个很重要的问题，在配制溶液时，因为过于注意快速进行完操作而不能等STZ完全融解则会产生注射剂量上的差异。在一次试验中，我们分三次注射，结果在最初注射的4-5只大鼠均没有成功，最后究其原因发现是由于STZ没有充分融解所致。
2）大鼠饲养问题
大鼠其实是一种很脆弱的动物，极易受到外界因素的影响，比如温度、湿度、光照和噪音等。温度、湿度以及光照大家一般都很注意，现在实验室条件也比较好，可以很好地控制，但噪音的影响可能就不一定很注意了。我这里所说的噪音并不是指大家平常所述的嘈杂和尖利的声音，这些我们自己都受不了，所以绝对不会给大鼠的，我说的是我们听不到或者认为不严重的问题。首先要注意，大鼠的听力范围是人的2倍，所以很多人们无法听到的次声波和超声波，对大鼠都会产生很大的影响。我们实验室人比较多，动物房经常有人走动，一次因为大鼠过多没有足够的架子放置，所以我一疏忽将几笼鼠直接放在了地上，结果在测量血糖时，放在架子上的90％成功，而在地上的一只也没有。
3）验证造模成功的时间间隔问题
根据《药理试验方法学》，声称注射STZ 3天之后即可测量血糖验证模型成功率。但在我们的试验中发现，注射STZ之后，动物的血糖总有波动，忽高忽低，一直要到7天左右才能够达到比较稳定。所以我们一般在注射STZ 6天后测量血糖，而且这样做还有一个优点就是模型对照组的血糖会一直很稳定，历次测量的波动均不会超过3mmol/L，给试验结果的分析带来很大的方便。
4）动物禁食问题
根据<方法学>，大鼠禁食的时间一般不要超过6-8小时，所以我们总是在晚上12点禁食，早晨8点采血。因为没有做过其他的禁食办法，所以不好讨论以上各位的方法。
5）大鼠的正常血糖范围
这从许多《实验动物学》中均能够查到，我现在手头没有带书，记得不是很清楚，但大体上和人相当，血糖范围是大约4-6mmol/L。
以上只是我个人的一点浅薄经验，只当抛砖引玉，请大家继续讨论。
2005-04-10 12:38
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xfsjnox
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见
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=92&id=1044967&sty=3&keywords=%B2%D9%D7%F7%B2%BB%CA%C7%BA%DC%CA%EC%C1%B7

0.1mol/l柠檬酸缓冲液的配制如下：
0.1mol/l柠檬酸母液：称2.10g柠檬酸（分子量210.14)溶于100ml双蒸水
0.1mol/l柠檬酸三钠母液：称2.94g柠檬酸三钠（分子量294.10）溶于100ml双蒸水
0.1mol/l柠檬酸缓冲液（PH4.5)是由0.1mol/l柠檬酸母液和0.1mol/l柠檬酸三钠母液混合配制的，大体比例是：1：1.32

注意配置好的STZ溶液放在冰袋里面保存！尽快用完，剩下的也不能用了。STZ毒性不小，操作者需注意自身的劳动保护

给你的附件中的protocol中提示国外禁食时间很短，缩短时间应该可以，但是听说（我没有办法证实）禁食时间长点成模效果较好些。
模型没有成功，可以追加STZ ,上面的protocol中提到。
2005-04-10 12:49
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看到大家的回帖，的确很有启发，我最初的回贴可能不够全面，这里有些问题的确有点奇特。看你的方法应该是大剂量一次注射造1型糖尿病模型，所以最好不要再注射一次了，很可能造成大批死亡。而且这样即使血糖上去了，也很难讲造模成功了。我在试验中用30毫克的量尾静脉注射，配合高脂造2型都有死亡的，你的方法没死亡的不大正常吧？还要大鼠的抵抗力比人要好，有很大一部分即使出现三多，并不代表造模成功，2周之后可能完全恢复。此时糖耐量肯定已经异常了。
2005-04-10 13:28
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