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蛋白质和糖学

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western blot 中抗体的重复应用问题 [精华]

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楼主

常驻站友

1楼

这个帖子发布于17年零212天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。

我因为做western blot 总是没结果，就严格按照cell signa的说明书进行操作，将多抗用5%的BSA稀释成10ml后4度冰箱孵育过夜，但是依然无结果。我将稀释后的抗体准备重复使用，但是原来未稀释前在-20度时抗体不结冰，现在稀释后则结冰，这样用时反复冻融会不会影响结果。还是抗体在稀释后应放4度保存？

另外我想问一下这样的抗体一般可用几次。
如果是在室温下孵育的抗体可不可以重复用，上次我用此抗体，连原来做出来的都未出结果。

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2003-08-06 08:47 浏览 : 21516 回复 : 48

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yaplewang 编辑于 2006-12-24 15:56

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丁香园VIP站友

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2楼

抗体工作溶液一般不主张储存反复使用，但是如抗体比较珍贵，可反复使用2－3次。稀释后应在2－3天内使用，4度保存，避免反复冻融。

2003-08-06 20:50

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入门站友

3楼

抗体可重复使用3次一般没有问题，可以-20储存，且夏天最好放-20储存，这样可以保存时间长一点。

2003-08-09 23:53

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• 全科医疗科诊疗范围、设置标准?全科医学专业执业范围、注册条件？

铁杆站友

4楼

本人建议：
稀释的抗体可以在4度下放1个月左右，不会影响抗体的效果，前提是加入0.2％的NaN3防腐，绝对可行，本人曾经用一个磷酸化抗体也是CS公司的p-erk用了2个月，到后来是牛奶都很淡了，照样信号很强的

2003-08-11 21:59

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