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内分泌

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论坛首页  >  内分泌与代谢病讨论版   >  糖脂代谢
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葡萄糖钳夹技术（血糖钳）动物实验中的若干技巧（原创） [精华]

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楼主 winner79
winner79
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这个帖子发布于15年零291天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
葡萄糖钳夹技术（血糖钳）是国际上公认的评价胰岛素抵抗的“金标准”，自1983年， Kraegen EW首次将其用于动物试验，从而成为一种经典的实验室科研技术。
目前随着国内实验条件的改善，越来越多的课题里开始采用血糖钳技术研究胰岛素抵抗，小弟在硕士课题里主要使用这个方法，在一年多的时间里逐渐根据文献摸索技术，其中有若干体会，在这里与大家分享，希望对有兴趣的同行有所帮助。
经典的方法大家都可以从书籍文献中查到，我不一一详述了。
1.在动静脉插管中文献报道多采用PE-50，但可能国内不易买的，可以考虑使用各个品牌的最细内径的腰麻管，一般医院都有，其优点是易于获得，内外径都够细，并且自带一个接头，便于接驳标准的注射器接头。
2.在 Kraegen EW的文章中，其动脉取血监测血糖变化，有一个自制的装置，没有的情况下可以使用小儿科使用的小号的静脉留置针，抽去针芯，使用外边的套管插入动脉（如果带针芯和容易导致血管破裂，大出血），便于固定，而且可以保证失血量最小。
3.大鼠如果是麻醉状态下手术，由于实验时间较长，需要置于恒温手术台上，如果没有可以使用手术灯照保持体温。
4.由于胰岛素、糖原和葡萄糖等的代谢都可能收到应激的影响，在实验过程中要尽量避免应激的发生，避免惊吓大鼠，固定时时可以使用胶布讲大鼠四肢粘在手术台上，不要使用绳结或橡皮筋，很容易导致肢端缺血。
今天先写到这，太晚了，改天有时间再补充。
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2005-04-08 01:15 浏览 : 6414 回复 : 21
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winner79 编辑于 2005-04-08 01:31
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zyc788615000
zyc788615000
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winner79你好:
看你上面写的就是个行家里手,我也正做这个试验其中的1,2点我已用到但目前仍有几点使我不能把试验进行下去
1.在动脉取血监测血糖变化时前半段时间还可以但是往往试验没进行完血就凝了,是否需要肝素化或肝素化的具体剂量是多少请指导.
2.大鼠的血液在10ml左右 到底怎样掌握才能不致于稀释血液而影响血糖或不引起心衰?
祈盼回音 谢谢!
2005-04-08 10:46
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楼主 winner79
winner79
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to:zyc788615000
回答你的问题
1.由于这种方法的时间较长，如果不肝素华，很难保持到实验结束的，肝素化的具体剂量没有一定，你可以参考一下文献，一般都提到了。
2.说到如何保证血液浓度，我也没有找到完美的解决方法，仅提供两点建议，一是尽量缩短实验时间，一般在熟练的情况下，通过大概六－八次的调节就可以达到平衡，这样可以把血液的稀释降低到最小；二是要注意从动脉抽血和回输的技巧，抽血的注射器要垂直固定，抽时要慢，血液比重大，与水会有一个分层，回输同理，但要说完全避免稀释我认为是不可能的。由于大鼠要不断抽血（失血），虽然有稀释，但总的血量仅有小量增加，还达不到引起心衰的程度，我曾经计算过出与入的量，你也可以计算一下。
这个实验的缺点就是手工操作太多，因此对实验的技术要求很高，建议正式做之前要充分练习，我当时大概练了200多只吧，才敢正式做。
2005-04-09 01:06
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楼主 winner79
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to:runninger
你好，看到你的pm了，在丁香园我是新手，pm如何使用我还不清楚，所以还是用EMAIL联系比较好，现在做实验了，没时间泡QQ，邮件尽量每天看吧，如果回复慢了，请见谅。
我发了EMAIL给你，这里再写一遍
konglingdong0223@sohu.com
小灵通：28560546，你可以在晚上打给我。
这个实验是我硕士时做的，我现在转方向了，以前的很多资料或给人或丢了，所以手里的资料不是很全，细节的东西恐怕也不准确了，不过我会尽量帮你的，毕竟我也经历了很长时间的摸索，痛苦的经历啊。
2005-04-13 22:32
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