发帖
每发1个新帖
可以获得0.5个丁当奖励
回帖

【求助】Taqman探针做SNP分型实验不是没有分型结果就是两次实验结果不一致是怎么回事啊？

楼主

入门站友

1楼

这个帖子发布于6年零136天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。

问题已关闭悬赏丁当:2

第一次用Taqman探针做SNP分型实验。10ul和20ul体系都做了好多次预实验，但是qPCR的结果真是太让人糟心了！
PCR仪用的是ABi的 step one plus。
1、第一个问题是，有的实验结果如下图所示，电脑根本没有判读基因分型结果。

2、第二个问题是，有结果的实验，同一批样本所有实验操作都一样但是得到的结果却不一样。

3、看了一下数据的原始图，判读为杂合子的样本其实好像只有一种荧光信号有起跳。如下图看起来只有蓝色荧光明显有信号起跳，绿色荧光的起跳并不明显。如果是杂合子是不是应该两种荧光信号起跳的曲线是相似的？还是跟两种荧光探针的质量有关系？

有没有做过这个实验的高手指点一下这些问题怎么解决啊？非常感谢！！最好是有没有南京的朋友，可以好好交流下，我是东大的。

邀请讨论

搜索

2014-10-22 15:37 浏览 : 4185 回复 : 8

投票
收藏 6
打赏
引用
分享
- 微信扫一扫
- 新浪微博
- 丁香客
- 复制网址
举报
- 广告宣传推广
- 政治敏感、违法虚假信息
- 恶意灌水、重复发帖
- 违规侵权、站友争执
- 附件异常、链接失效
- 其他

• 腹腔镜术中「钓鱼法」上提子宫技巧（视频）

老羽

入门站友

2楼

我也是分型不好。。
绿色荧光没有起跳是说明没扩增？或者特异性不好？
以下是我的情况：
靠左边的高度最低的是一个wildtype基因型，中间两个X是杂合子情况，最右边最高的X是纯合突变基因型。

2014-11-10 11:33

投票
收藏
打赏
引用
分享
- 微信扫一扫
- 新浪微博
- 丁香客
- 复制网址
举报
- 广告宣传推广
- 政治敏感、违法虚假信息
- 恶意灌水、重复发帖
- 违规侵权、站友争执
- 附件异常、链接失效
- 其他

• 【心电旋律 27】青年男性心肌梗死背后的真凶！

ling2786

入门站友

3楼

对于SNP分型实验，首先第一步是DNA的提取，如果提取DNA原始载量一致性较好，则结果出来会漂亮跟多。
第二：分型不出来，用实时荧光定量PCR仪器扩增的，可以从扩增曲线判断是纯合子还是杂合子。一般来说，杂合子2种扩增曲线都会有明显的S型曲线出现，也就是你说的起跳现象，且线形比较相似；纯合子其中一条曲线扩增明显，另外条没有起跳现象。如果知道两者之间的荧光强度，还可以看见荧光强度比例大致一致。
另外，分型结果分析时，需要根据实验的具体情况进行设置的，设置不同，得出来的软件判读结果也会不一致。

2014-12-26 12:14