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遗传发育

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论坛首页  >  遗传学与发育生物学讨论版   >  实验技术
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【求助】关于小鼠1细胞期胚胎体外培养的问题，恳请同行指点！

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楼主 claire7589
claire7589
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这个帖子发布于6年零194天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
问题已关闭悬赏丁当:5
我最近在学习做鼠胚试验，使用的小鼠是昆明鼠，试验内容是将 1细胞胚胎体外培养至囊胚阶段。
可是做的很不成功，1细胞发育成囊胚的比例很低，平均10个胚胎才能有1-2个发育至囊胚阶段。我很困惑，不知道为什么？该做什么样的改进。下面我将平时试验的照片传上来，恳请同行指点！
1.第1天取见栓小鼠1细胞胚胎，下图是取完培养至第2天。试验过程中我经常遇到这样的现象：很多胚胎都是处在1细胞期，不知是未受精还是没分裂呢？迷惑。。

2.这是第2次做的，似乎2细胞期的多一些了，但是还是有未分裂的胚胎，这正常吗？未分裂的细胞是未受精的细胞吗？未受精细胞应该占多少比例才算正常？

3.这是取出胚胎后培养至第5天，也就是培养96h以后，应该发育至囊胚阶段了，可很受打击的是每次试验的结果都很不如人意，1细胞发育成囊胚的比例很低，平均10个胚胎才能有1-2个发育至囊胚阶段。不清楚到底是什么原因？我认为我的试验已经尽量注意细节了，试验过程尽量控制时间，使用sigma的M16培养液制备液滴，液滴过夜平衡。M2培养液体外操作。在体式显微镜下操作时安装了恒温台。

请问还有什么关键的细节需要注意吗？比如恒温台的温度应该调节到多少度？等问题。。
期待同行的指点！谢谢！！
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2014-08-20 14:00 浏览 : 1541 回复 : 3
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claire7589 编辑于 2014-08-20 14:05
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zoey918
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我也在摸索着做，大家探讨
1，胚胎的发育潜能我觉得和老鼠的周龄有关系，周龄太大，胚胎发育潜能明显下降
2，培养液我都是用的vitrolife的序贯培养液，效果可以，不过我觉得和培养液关系不大，有时候胚胎挑不完全，在EARLE‘S 他们也照常发育
3，恒温台用37°
4，取出输卵管先在培养箱中培养5-10分钟后再找胚胎效果比较好
2014-09-02 00:00
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同求助，我们实验室用的是ICR小鼠，每次10iu PMSG 和HCG超排，母鼠大约8WEEK，超排效果很不理想，每只也就10个胚胎，而且经常出现发育不同步的情况。培养液用的是培养人胚的G1养到囊胚，发育率也不是很理想。求解？
2015-03-23 16:49
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klxpp123
同求助，我们实验室用的是ICR小鼠，每次10iu PMSG 和HCG超排，母鼠大约8WEEK，超排效果很不理想，每只也就10个胚胎，而且经常出现发育不同步的情况。培养液用的是培养人胚的G1养到囊胚，发育率也不是很理想。求解？

不知道你问题解决没有
我们开始也用PMSG效果不好，后来直接用人用的HMG了，效果不错。而且一般我用到15IU，觉得效果不错。
HCG注射的时间与取卵（或者胚胎）时间要把握好，就是临床上说的**时间要弄对，否则会取卵不多或质量不好。
感觉动物用的制品纯度不高。
而且我觉得和动物的批次有关系。
关于培养液的问题，个人感觉只要胚胎好了，和用什么培养液没啥关系。
2015-07-06 19:35
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