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神经生物

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论坛首页  >  神经生物学讨论版   >  细胞培养
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【求助】小胶质细胞原代培养

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楼主 柳橙bb
柳橙bb
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这个帖子发布于6年零263天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
新手一枚，最近在做小胶质细胞原代培养，胶质混合培养倒是好说，但是用了各种方法分离，产量非常低不说，分下来第二天细胞好多就飘了，请问做过的前辈，这个怎么办？还有就是原代培养的小胶质细胞能不能传代？如果能的话，传几代合适？园子里面关于这方面的帖子也非常多，都没有说到这个问题的，各位做过的前辈出来指点一下吧，新手伤不起，都养了几个月了，一点成果都木有，拜托拜托，高手出来解答一下吧。。。。。
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2014-08-05 15:40 浏览 : 12603 回复 : 31
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我一般用拍的方法分离。拍细胞的前一天换液，第二天直接拍，三个瓶子摞一起，用手拍个15分钟左右，小胶质细胞就会下来，把上清里面的小胶质细胞收集，按需加上部分新的培养基或离心倒掉一部分旧的培养基（切记完全用新的培养基），种板，待小胶质细胞贴壁后，换液，饥饿，做实验。小胶质细胞不能传代。拍细胞可以连续拍两次，今天用完后，加上新的培养基，第二天接着再拍一次。
2014-08-05 17:20
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楼主 柳橙bb
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dhq061224168
我一般用拍的方法分离。拍细胞的前一天换液，第二天直接拍，三个瓶子摞一起，用手拍个15分钟左右，小胶质细胞就会下来，把上清里面的小胶质细胞收集，按需加上部分新的培养基或离心倒掉一部分旧的培养基（切记完全用新的培养基），种板，待小胶质细胞贴壁后，换液，饥饿，做实验。小胶质细胞不能传代。拍细胞可以连续拍两次，今天用完后，加上新的培养基，第二天接着再拍一次。

谢谢，非常感谢，前辈麻烦再请教一个问题，直接拍下来种板细胞密度不是很低么？种板后你是多久换液啊？饥饿多久才做实验呢？拜托拜托，一定要再回答我一次，谢谢。。。。
2014-08-06 10:04
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柳橙bb
谢谢，非常感谢，前辈麻烦再请教一个问题，直接拍下来种板细胞密度不是很低么？种板后你是多久换液啊？饥饿多久才做实验呢？拜托拜托，一定要再回答我一次，谢谢。。。。
我的经验是，直接拍下来的细胞密度要比摇床摇下来的多，细胞贴壁状态也要好的多。10只大鼠乳鼠或20只小鼠乳鼠可以铺6个瓶，6个瓶拍下来的小胶质能种一个6孔板，我一直是这么做的。种板后第二天细胞贴壁后就可以换液饥饿，我一般饥饿一晚上。有时候，我也饥饿加药同时进行，就是贴壁后第二天换成无血清培养基，同时加药处理。上面括号里有点错误，切记不要完全换成新的培养基，旧的培养基中含有星形胶质细胞分泌的细胞因子能够支持小胶质细胞的活力。
2014-08-06 10:17
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