【求助】求赐教小鼠胎鼠皮层原代神经元培养

本人研二小硕一枚，在观摩实验室师姐演示一次胎鼠原代神经元培养（后来培养失败，师姐推测原因可能是血清问题，当时用的是国产血清，品牌就不透露了）后，鉴于演示实验的失败，因本人是新手，确实不知失败的原因在哪，所以又大量浏览了坛子里有关原代培养的一些贴子。有了前期积累后，在8.1本人独立地开始了个人的第一次胎鼠原代神经元培养。在这里要感谢 @holywater ，本次实验主要是参考了其发在坛子里的一篇原代培养贴子： http://www.dxy.cn/bbs/topic/17651341 ，其次是众多的参与分享及讨论的坛友，在此就不一一感谢了，但正是有了你们才使像我之流的小白学到了很多实验室学不到的东西。直接切入主题，以下是我这次实验的Protocol，然后后面两幅图是在培养两天后拍摄的，欢迎前辈及各位坛友赐教！
一.Protocol （20140731）
1.取材
胎鼠，取孕16-18d的母鼠
2.培养基



Neurobasal+B27+Glutamin (有无影响不大，自己验证过)+PS（标准用量的一半）
3.解剖，全程冰上操作
解剖时液体的选择：DMEM-HG
4.培养器皿
35 mm Dish
5.剥离


6.消化
0.125%胰酶：
37℃ （CO2 培养箱） 20min,每5min晃动一次。
7.终止消化
将团块从35mm Dish转移到离心管中（DMEM-HG+10%FBS+PS）
8.吹打
分步吹打法：缓慢吹打。每吹打10次后静置2min,取上层培养液到新的离心管并加入新鲜培养液继续吹打。进行3次分步吹打后，丢弃未吹打开的团块。
9.离心，重悬
800 rpm 5min, 加入
DMEM-HG+10%FBS+PS
重悬10.计数，种板
密度：3.5X10⁵个/ml,铺好板后作十字交叉摇晃，5h后全量换液为NB（换液前轻轻摇晃以去除细胞碎片，用NB培养基洗过一次）
二.代表性附图（20X）

培养 1d

培养2d三.疑问
1.从图片上看，培养第一天的神经元貌似长得还行，已经有突触开始生长，为什么到第二天反而消失了？
2.培养第一天里面有折光度高（很亮的物质，已摇晃，确定不是细胞碎片）量少，但随着培养时间的推移，有增加的趋势（目前来看如此，还有待后续观察）。
四.感谢各位坛友百忙中不吝赐教，在此谢过