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【求助】峰纯度一定要合格么？

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楼主 死不起
死不起
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这个帖子发布于6年零261天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
峰纯度作为 有关物质专属性的一个重要指标，被广泛应用，但峰纯度受样品浓度，色谱峰形状，基线波动等多种因素影响，现在遇到一个问题就是：一个药物，供试品溶液主峰峰型很好，没有过载和拖尾，也在dad检测线性范围内；使用两种药典上的经典方法做，都没分出新杂质，改变洗脱强度也没看到主峰出来新杂质。把浓度稀释五倍（0.8mg/ml），竟然合格了。现在不知如何是好？是使用原来的方法继续做（峰纯度不合格），会不会被发补或者退审？还是使用稀释五倍的样品溶液做为标准方法？现在，国家有没有这方面的要求，有关物质检测，峰纯度一定要合格么？
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2014-05-06 11:26 浏览 : 13271 回复 : 17
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没杂质或是杂质很少，按理应该合格...是不是其他原因造成。
2014-05-06 12:26
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xiaodongxie1984
xiaodongxie1984
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这是园子里的园友水果婷于2011-12-17 17:07发的帖子，希望对你有所帮助
另外当被检测峰的浓度很高时，会导致尤其是峰顶点处的光谱由于浓度高而变形，即便是纯的组分也很可能得到很低的纯度因子；



关于峰纯度
1.关于峰纯度的原理：工作站依据光谱匹配度来衡量峰纯度，光谱可以用来表征化合物分子结构特征，在进行峰纯度检测时，工作站会将被检测峰上采集的所有光谱做归一化处理，然后比较光谱的匹配性。如果一个色谱峰中只含有一种组分(峰纯度很好)，峰上各个时间点采集到的光谱的外形几乎是一致的，做归一化处理后所有的光谱几乎一样的，如果所有的光谱一模一样，则匹配因子将达到1000(100%匹配)；如果一个色谱峰含有多种组分，只要组分间的光谱有差异，当将峰上每个采集时刻的光谱做归一化处理之后匹配度自然很差。峰纯度的阈值相当于一个衡量标准，能影响到峰纯度检测直接给出的结果，我们可以选择由工作站来计算阈值(工作站根据被检测峰的信噪比计算，因此每个峰给出的阈值会略有不同)，也可以自行设定固定阈值，推荐值是990(相当于99%相似)。

2.利用光谱进行纯度检测的局限性：
a.当我们用普通的C18柱(而非手性柱)分析手性样品时，纯度检测就无能为力了，手性组分中不同消旋体之间的光谱是一致的；
b.如果混合物中组分间的光谱类似，而各组分在色谱柱上的扩散程度也几乎一致(完全没有分开)，各个时间点采集到的混合光谱几乎是一致的，也会得到很高的纯度匹配因子；
c.另外当被检测峰的浓度很高时，会导致尤其是峰顶点处的光谱由于浓度高而变形，即便是纯的组分也很可能得到很低的纯度因子；
d.如果采集的光谱较少，则纯度检测的结果基本上是不可靠的，假设峰上只采集了一张光谱，即便是混合物，纯度因子却能达到1000。
总结看来，峰纯度功能可以给出否定的答案(色谱峰是混合物)，很难给出肯定的答案(色谱峰是纯的)，只能说可能是纯的，此时峰纯度信息仅作为参考信息！

3.峰纯度检测的步骤
a.设置纯度检测阈值：点击Spectra(光谱)菜单下的Spectra Options(光谱选项)，在光谱选项窗口点击Purity(纯度)，或选择Calculate Threshold(计算阈值)，或选择Fixed Threshold(固定阈值)，建议选择计算阈值，如果纯度检测结果显示的计算阈值过小再考虑设置固定阈值，推荐的固定阈值是990。



b.调用数据文件。注意，如果要使用峰纯度检测功能，采集数据之前一定要在DAD参数设置窗口选择保存全部光谱(英文工作站选择All)。
c.将光标切换到峰纯度检测状态：点击Spectra(光谱)菜单下的Select Peak Purity(选择峰纯度)，光标即变为峰纯度检测状态，点击要检测的色谱峰即可得到结果。

d.峰纯度的结果：
在右下方的窗口中可以看到色谱峰、阈值曲线和相似度曲线，相似度曲线对应的点低于阈值曲线即表明没有超出阈值
可以点击峰纯度信息快捷键(如下图)，查看当前的Purity factor(峰纯度因子)和Threshold(阈值)。
2014-05-06 13:36
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huiyu207
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死不起
峰纯度作为 有关物质专属性的一个重要指标，被广泛应用，但峰纯度受样品浓度，色谱峰形状，基线波动等多种因素影响，现在遇到一个问题就是：一个药物，供试品溶液主峰峰型很好，没有过载和拖尾，也在dad检测线性范围内；使用两种药典上的经典方法做，都没分出新杂质，改变洗脱强度也没看到主峰出来新杂质。把浓度稀释五倍（0.8mg/ml），竟然合格了。现在不知如何是好？是使用原来的方法继续做（峰纯度不合格），会不会被发补或者退审？还是使用稀释五倍的样品溶液做为标准方法？现在，国家有没有这方面的要求，有关物质检测，峰纯度一定要合格么？
峰纯度测试本来就只是作为参考，一般FDA还是以LC-MS测试为主。看看主峰内是否有杂的分子量存在，国内申报因为考虑到仪器投入的问题，所以没有强制要求LC-MS，还是以峰纯度为主。
但是LZ你稀释5倍后峰纯度合格并不能证明主峰内没有杂质峰存在，浓度稀释五倍，杂质也相应被稀释了，可能5倍过后，已经没办法满足杂质的灵敏度要求了，所以峰纯度过了。
根据我的经验，若是峰高在1000mAU左右时，峰纯度（特别是API的）不合格，那就有极大的可能是还有杂质包裹在主峰内。
药典方法也要看是什么时候的，太老的受限于仪器可能本身就没考虑过。若是LZ的制程与药典的一致，那使用药典方法做个结果也还能凑合着过，若是制程有变更，仍沿用药典方法，那就要考虑不同制程杂质不一样的可能性了。
2014-05-06 15:43
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