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生物制药

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关于抗体电荷异构体之间是否存在相互转化问题? [精华]

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楼主 cpu随风而逝
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这个帖子发布于6年零335天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。

如题,碰到的个问题,我用制备型HPLC分别分离收集酸碱性异构体,按照主峰峰谷收集,之后进行浓缩,去分析型检测,所用柱子介质一致,只是体积不同。如图所示 结果虽然酸性异构体中酸性组分明显变多,但仍存在目的组分。目的组分纯度将近100,收集的碱性异构体更加神奇,酸性组分与碱性组分均增加。,目的组分的出现比较合理,收集碱性组分时,不应该还存在酸性组分。所以请教各位大神,是否有看到类似文献说 酸碱性异构体之间会相互转换 ?
我个人知识,也许会有转换,比如C端赖氨酸存在显碱性峰,过程中被切除变成酸性异构体? 只是原先结果显示该蛋白赖氨酸已经大部分被切除 ,,
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2014-04-02 14:18 浏览 : 62818 回复 : 63
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horizon801 编辑于 2015-08-28 20:02
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楼主 cpu随风而逝
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thanks0576
无图无真相,楼主有图谱吗?感觉不太可能会转化的,你的实验具体是怎么设计的,分别收集三个峰再去IEC分析?
已经上图
2014-04-08 19:09
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  • 10楼
这个问题略久了,首先感谢各位战友的积极回答。 对于这个课题,后续又做了一些研究。 本人经过脱K之后发现,碱性峰比例相应减少(仍存在),而酸性第一个峰的比例明显上升,表明此酸性峰中确由碱性峰的一个成分脱K而来,另外碱性峰中并非只是一个翻译后修饰导致,而是一个混合物。对于是什么导致的翻译后修饰,样品正在送检打质谱,待日后再讨论。
ylhuang0502 说得现象以及文献我之前也有阅读过,因为我这里是纯化,用的制剂纯品,并不涉及培养液中的铜。
为了得到足够纯的样品,将第一次纯化的再重复分离,样品纯度上升不少,,但依然存在上述的现象。 将碱性组分一直往后收集,收集完不浓缩,直接分析,仍能见到约有10%的主峰。这个现象也说明,酸碱性质相近,在这样的分离条件下,(HPLC,WCX-10柱子)不能完全分离。
综上,出现最开始的情况,两种因素都存在,分离效果不佳以及转化问题。
版主zhulikou431留言:
加分鼓励。
2014-12-01 09:10
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zhulikou431 编辑于 2014-12-13 16:09
  • • 2021协和初审
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yww2012
请问,你是用的N2000软件吧?
并不是,,就用的agilent chemstation。
2015-08-10 12:24
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