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【求助】质控样品回收率过高的问题

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楼主 suoyigao10
suoyigao10
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这个帖子发布于7年零133天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
最近在做酶活性方面的实验，实验确定标准曲线的标准品浓度是从0.2到25.6的范围内，质控标准取3个，高的是12，中间的是3.6，低的是0.9，可是在实验中，中和低的两个质控样品的回收率总是超过120%，现在请教一下大家，有谁知道这是什么原因吗？为什么中和低的两个质控品会偏高的主意严重？或者说谁能出个主意帮忙解决这个问题啊，谢谢啦！
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2013-10-22 22:26 浏览 : 4283 回复 : 2
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medesone
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  • 2楼
suoyigao10
最近在做酶活性方面的实验，实验确定标准曲线的标准品浓度是从0.2到25.6的范围内，质控标准取3个，高的是12，中间的是3.6，低的是0.9，可是在实验中，中和低的两个质控样品的回收率总是超过120%，现在请教一下大家，有谁知道这是什么原因吗？为什么中和低的两个质控品会偏高的主意严重？或者说谁能出个主意帮忙解决这个问题啊，谢谢啦！
采用的是对照品法还是样品加入法？
采用何种检测方法呢？UV？HPLC？
首先高中低的浓度差过大，高与低差距10倍，选择这样的浓度差的依据是什么？中间浓度是标准中样品的检测条件吗？从低到高浓度间做过线性试验吗？线性是否符合要求？
高浓度回收能达到多少？三浓度的RSD又有多少呢？
2013-10-23 11:49
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  • 3楼
从楼主提供的情况来看，可能存在线性范围选取不合理的问题。你选取高中低三个点的值不是非常合适。太集中于标准曲线的下段。一般来说中点选取标准曲线的中间值，如5～10的范围就选取7.5，高点和低点选取标准曲线靠近最高值和最低值25%的范围来选取，如标准曲线范围是0～10，那么低点在0～2.5的范围内选取，高点在7.5～10的范围内选取。在选好高中低三个点后进行回收率的检测，观察回收率的情况。如果中点能过，高点和低点不能过，说明标准曲线范围太宽，已超过其成线性的范围，如果从低到高回收率越来越差，则说明标准曲线的范围选到了其成线性范围的上限，整个范围应向下移动。如果从低到高回收率越来越好，则说明标准曲线的范围选到了其成线性范围的下限，整个范围应上下移动。合适的标准曲线范围应该是和这个方法检测信号成线性的范围重合的，这样才能够真正做到准确定量。
从楼主提供的信息上看不出来是采用的何种方法在检测，一般来说，分光光度法的回收率要做到不超过5%，各个点的RSD不超过5%，线性R2至少两个9，ELISA法回收率要做到不超过15%，各个点的RSD不超过15%，四参数曲线R2值至少一个9，细胞方法回收率、RSD和四参数曲线R2值则可以比ELISA再宽一点。
2014-06-27 09:34
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