南天之马

kingsarin

南天之马

老师好， 我想问个问题， 实验结束后怎么冲洗色谱柱，一般是用10%甲醇冲30分钟， 再用纯甲醇冲30分钟。  我最近看到谢沐风老师在“把液相色谱做到打游戏”一文中说， 用流动相冲30分钟（流动相中没有盐）， 或者依次用2%甲醇和20%甲醇各冲30分钟就可以了。 

请老师评价一下哪种方法比较好。 谢谢。 

试验后色谱柱的冲洗

1. 最为常用的C8柱、C18柱
1.1 流动相仅为乙腈-水或甲醇-水时
继续冲洗30分钟，流速1.0ml/min，柱温保持试验时温度，即可。
1.2 水相中有无机盐、表面活性剂或三乙胺、高氯酸等物质时
  先采用纯水（或含有2%甲醇），冲洗A管路（试验采用哪个管路，就要从头到尾冲洗该管路），时间30分钟（如流动相中有表面活性剂，适当增加时间），流速1.0ml/min，柱温可较试验温度高出5~10℃；随后更换成20%甲醇再冲洗30分钟，流速1.0ml/min，柱温箱加热装置关闭。结束后取下色谱柱放置阴凉处。

一般我们在冲洗色谱柱时，首先用你流动相相同比例的有机相-水（即把缓冲液换成纯水）冲洗，再用纯有机相冲洗；具体冲洗时间为10~20倍的柱体积；在冲洗柱子的时候一定要关闭柱温箱，切忌冲完柱子后关闭柱温箱。

对于第二天还需要继续用同样色谱条件的色谱柱，可以只用相同比例的有机相-水冲洗，但每隔几天还是要用纯有机相冲洗一次的。

对于含有离子对试剂的流动相冲洗，可以适当添加高氯酸冲洗。

Kingsarin 老师，非常感谢， 太谢谢您的回答了。 想问一下，  为什么说冲洗柱子的时候关闭柱温箱呢？ 

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老师好， 我想问个问题， 实验结束后怎么冲洗色谱柱，一般是用10%甲醇冲30分钟， 再用纯甲醇冲30分钟。  我最近看到谢沐风老师在“把液相色谱做到打游戏”一文中说， 用流动相冲30分钟（流动相中没有盐）， 或者依次用2%甲醇和20%甲醇各冲30分钟就可以了。 

请老师评价一下哪种方法比较好。 谢谢。 

试验后色谱柱的冲洗

1. 最为常用的C8柱、C18柱
1.1 流动相仅为乙腈-水或甲醇-水时
继续冲洗30分钟，流速1.0ml/min，柱温保持试验时温度，即可。
1.2 水相中有无机盐、表面活性剂或三乙胺、高氯酸等物质时
  先采用纯水（或含有2%甲醇），冲洗A管路（试验采用哪个管路，就要从头到尾冲洗该管路），时间30分钟（如流动相中有表面活性剂，适当增加时间），流速1.0ml/min，柱温可较试验温度高出5~10℃；随后更换成20%甲醇再冲洗30分钟，流速1.0ml/min，柱温箱加热装置关闭。结束后取下色谱柱放置阴凉处。

一般我们在冲洗色谱柱时，首先用你流动相相同比例的有机相-水（即把缓冲液换成纯水）冲洗，再用纯有机相冲洗；具体冲洗时间为10~20倍的柱体积；在冲洗柱子的时候一定要关闭柱温箱，切忌冲完柱子后关闭柱温箱。

对于第二天还需要继续用同样色谱条件的色谱柱，可以只用相同比例的有机相-水冲洗，但每隔几天还是要用纯有机相冲洗一次的。

对于含有离子对试剂的流动相冲洗，可以适当添加高氯酸冲洗。

Kingsarin 老师，非常感谢， 太谢谢您的回答了。 想问一下，  为什么说冲洗柱子的时候关闭柱温箱呢？ 

是这样的，如果你冲完柱子后关闭柱温箱，等柱温冷却下来后，就会导致柱内液体体积减少

柱内流动相体积变小， 那会怎样？