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【公告】 HPLC实践技术SOS专区(HPLC问题请在此跟贴发问!) [精华]

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kingsarin
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南天之马
kingsarin
南天之马

老师好, 我想问个问题, 实验结束后怎么冲洗色谱柱,一般是用10%甲醇冲30分钟, 再用纯甲醇冲30分钟。  我最近看到谢沐风老师在“把液相色谱做到打游戏”一文中说, 用流动相冲30分钟(流动相中没有盐), 或者依次用2%甲醇和20%甲醇各冲30分钟就可以了。 

请老师评价一下哪种方法比较好。 谢谢。 

试验后色谱柱的冲洗

1. 最为常用的C8柱、C18柱
1.1 流动相仅为乙腈-水或甲醇-水时
继续冲洗30分钟,流速1.0ml/min,柱温保持试验时温度,即可。
1.2 水相中有无机盐、表面活性剂或三乙胺、高氯酸等物质时
  先采用纯水(或含有2%甲醇),冲洗A管路(试验采用哪个管路,就要从头到尾冲洗该管路),时间30分钟(如流动相中有表面活性剂,适当增加时间),流速1.0ml/min,柱温可较试验温度高出5~10℃;随后更换成20%甲醇再冲洗30分钟,流速1.0ml/min,柱温箱加热装置关闭。结束后取下色谱柱放置阴凉处。






一般我们在冲洗色谱柱时,首先用你流动相相同比例的有机相-水(即把缓冲液换成纯水)冲洗,再用纯有机相冲洗;具体冲洗时间为10~20倍的柱体积;在冲洗柱子的时候一定要关闭柱温箱,切忌冲完柱子后关闭柱温箱。

对于第二天还需要继续用同样色谱条件的色谱柱,可以只用相同比例的有机相-水冲洗,但每隔几天还是要用纯有机相冲洗一次的。

对于含有离子对试剂的流动相冲洗,可以适当添加高氯酸冲洗。


Kingsarin 老师,非常感谢, 太谢谢您的回答了。 想问一下,  为什么说冲洗柱子的时候关闭柱温箱呢? 


是这样的,如果你冲完柱子后关闭柱温箱,等柱温冷却下来后,就会导致柱内液体体积减少

2016-05-18 16:27
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老师好, 我想问个问题, 实验结束后怎么冲洗色谱柱,一般是用10%甲醇冲30分钟, 再用纯甲醇冲30分钟。  我最近看到谢沐风老师在“把液相色谱做到打游戏”一文中说, 用流动相冲30分钟(流动相中没有盐), 或者依次用2%甲醇和20%甲醇各冲30分钟就可以了。 

请老师评价一下哪种方法比较好。 谢谢。 

试验后色谱柱的冲洗

1. 最为常用的C8柱、C18柱
1.1 流动相仅为乙腈-水或甲醇-水时
继续冲洗30分钟,流速1.0ml/min,柱温保持试验时温度,即可。
1.2 水相中有无机盐、表面活性剂或三乙胺、高氯酸等物质时
  先采用纯水(或含有2%甲醇),冲洗A管路(试验采用哪个管路,就要从头到尾冲洗该管路),时间30分钟(如流动相中有表面活性剂,适当增加时间),流速1.0ml/min,柱温可较试验温度高出5~10℃;随后更换成20%甲醇再冲洗30分钟,流速1.0ml/min,柱温箱加热装置关闭。结束后取下色谱柱放置阴凉处。






一般我们在冲洗色谱柱时,首先用你流动相相同比例的有机相-水(即把缓冲液换成纯水)冲洗,再用纯有机相冲洗;具体冲洗时间为10~20倍的柱体积;在冲洗柱子的时候一定要关闭柱温箱,切忌冲完柱子后关闭柱温箱。

对于第二天还需要继续用同样色谱条件的色谱柱,可以只用相同比例的有机相-水冲洗,但每隔几天还是要用纯有机相冲洗一次的。

对于含有离子对试剂的流动相冲洗,可以适当添加高氯酸冲洗。


Kingsarin 老师,非常感谢, 太谢谢您的回答了。 想问一下,  为什么说冲洗柱子的时候关闭柱温箱呢? 


是这样的,如果你冲完柱子后关闭柱温箱,等柱温冷却下来后,就会导致柱内液体体积减少


柱内流动相体积变小, 那会怎样? 

2016-05-18 16:38
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老师好, 我想问个问题, 实验结束后怎么冲洗色谱柱,一般是用10%甲醇冲30分钟, 再用纯甲醇冲30分钟。  我最近看到谢沐风老师在“把液相色谱做到打游戏”一文中说, 用流动相冲30分钟(流动相中没有盐), 或者依次用2%甲醇和20%甲醇各冲30分钟就可以了。 

请老师评价一下哪种方法比较好。 谢谢。 

试验后色谱柱的冲洗

1. 最为常用的C8柱、C18柱
1.1 流动相仅为乙腈-水或甲醇-水时
继续冲洗30分钟,流速1.0ml/min,柱温保持试验时温度,即可。
1.2 水相中有无机盐、表面活性剂或三乙胺、高氯酸等物质时
  先采用纯水(或含有2%甲醇),冲洗A管路(试验采用哪个管路,就要从头到尾冲洗该管路),时间30分钟(如流动相中有表面活性剂,适当增加时间),流速1.0ml/min,柱温可较试验温度高出5~10℃;随后更换成20%甲醇再冲洗30分钟,流速1.0ml/min,柱温箱加热装置关闭。结束后取下色谱柱放置阴凉处。






一般我们在冲洗色谱柱时,首先用你流动相相同比例的有机相-水(即把缓冲液换成纯水)冲洗,再用纯有机相冲洗;具体冲洗时间为10~20倍的柱体积;在冲洗柱子的时候一定要关闭柱温箱,切忌冲完柱子后关闭柱温箱。

对于第二天还需要继续用同样色谱条件的色谱柱,可以只用相同比例的有机相-水冲洗,但每隔几天还是要用纯有机相冲洗一次的。

对于含有离子对试剂的流动相冲洗,可以适当添加高氯酸冲洗。


Kingsarin 老师,非常感谢, 太谢谢您的回答了。 想问一下,  为什么说冲洗柱子的时候关闭柱温箱呢? 


是这样的,如果你冲完柱子后关闭柱温箱,等柱温冷却下来后,就会导致柱内液体体积减少


柱内流动相体积变小, 那会怎样? 


柱内流动相体积减少,部分固定相没有浸在液体中啊,导致部分固定相干涸。

2016-05-19 12:13
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kingsarin
宋冰娜
minkeyhe
我想请教各位老师:情况是这样的,要是连续几天都得做同一个项目,那当天实验完毕了,色谱柱该怎样保存呢?我一直的做法就是先用10%乙腈水冲洗约30min,在按梯度冲洗到100%乙腈保存,然后第二天有得花时间逆梯度冲洗柱子,感觉这样做效率有点低。请问大家有什么好的方法呢?

求指教,我们现在也是遇到了这种情况,您当时是怎么解决的呢??还有实验室在洗柱时用的是甲醇,就目前这种情况(流动相是乙腈)用乙腈平衡的会不会快一点??


对于第二天的色谱条件与头一天相同,偷懒的方法就是只用相同比例的有机相-水冲洗色谱柱,第二天就可以直接上流动相了;但这种方法不宜长用,最好每周还是能用纯有机相冲洗2~3次,以便冲洗出残留在柱子中极性较小的杂质;

实验室在冲洗色谱柱时有机相一般是使用甲醇,之所以选择甲醇而不选择乙腈,个人以为是从经济上考虑的,但是现在甲醇和乙腈的价格相差无几,且乙腈的洗脱能力比甲醇更强,所以用乙腈平衡是没有问题的。



乙腈容易聚合,长期保存色谱柱,不会对色谱柱柱效有影响吗
2016-06-04 23:21 来自 Android客户端
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