发帖
每发1个新帖
可以获得0.5个丁当奖励
回帖

【求助】western blotting如何从组织提蛋白，求详细步骤

只看楼主
页码直达：
直达末页

楼主

cyanny

肿瘤内科

入门站友

1楼

这个帖子发布于6年零84天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。

我先用的细胞提蛋白做的western，做了半年，换了三种抗体，总算有条带出来了，现在准备用组织提蛋白来做了，但是实验室的师兄师姐都没做过组织提蛋白，所以求助，求超详细步骤，多谢多谢多谢

邀请讨论

搜索

2013-04-02 15:57 浏览 : 66391 回复 : 53

投票 3
收藏 73
打赏
引用
分享
- 微信扫一扫
- 新浪微博
- 丁香客
- 复制网址
举报
- 广告宣传推广
- 政治敏感、违法虚假信息
- 恶意灌水、重复发帖
- 违规侵权、站友争执
- 附件异常、链接失效
- 其他

• 诡异的宽QRS心动过速，用药没转复

收起全部有料回复

伽利略

常驻站友

44楼

cyxdxy
从组织中提取蛋白后蛋白浓度一般都有10mg/ml左右，你的浓度太低了，没控制好组织质量与裂解液的比例，建议0.1g组织最多加1ml裂解液，并碾磨充分

你好，有问题请教

假设组织本身完全相同

1、剪取80mg组织，加入RIPA裂解液（含PMSF，蛋白酶等）1ml ，

2、剪取50mg组织，加入RIPA裂解液（含PMSF，蛋白酶等）1ml

仅组织量不同，其他处理都完全相同。均以BCA法测总蛋白浓度，理论上，结果会有不同么？会不会因为取组织量不同（正常范围内50-100mg）而明显影响结果，以此为例，是否80mg的最后测得的蛋白浓度明显与50mg测得结果不同？

2016-05-24 11:42

投票 4
收藏 1
打赏
引用
分享
- 微信扫一扫
- 新浪微博
- 丁香客
- 复制网址
举报
- 广告宣传推广
- 政治敏感、违法虚假信息
- 恶意灌水、重复发帖
- 违规侵权、站友争执
- 附件异常、链接失效
- 其他

伽利略编辑于 2016-05-24 14:17

• 【其它】谈谈个人对医美行业的所谓“浮躁”的一点想法

灵语晗001

病理科

入门站友

42楼

shadowflee007
大部分公司的试剂盒上说的很清楚对冻存标本蛋白提取效果不好，但我们实验室都是用的冻存标本，也能提取出来，一定要用液氮研磨组织

您好，那你们做出来的结果如何呢

2016-03-14 22:54

投票 8
收藏
打赏
引用
分享
- 微信扫一扫
- 新浪微博
- 丁香客
- 复制网址
举报
- 广告宣传推广
- 政治敏感、违法虚假信息
- 恶意灌水、重复发帖
- 违规侵权、站友争执
- 附件异常、链接失效
- 其他

• 丁香早知道-6.20 | 中国医学院江湖图谱，你校排哪？

asi20071005

常驻站友

热

39楼

赤诚千年

组织块只有15-20mg，加裂解液只有200微升，用玻璃匀浆器之后裂解液根本倒不出来，各位前辈有没有什么更好的方法。

我做的组织更少，10mg都不到。我是把组织收集到500ul的ep管，然后加60-80ul左右的裂解液，然后超声把组织超碎。没有超声仪的话可以用玻璃研磨棒，淘宝上有买，是跟1.5mlep管匹配的。把组织从-80或液氮取出后要趁着组织还是硬的时候赶紧研磨，这样比较容易磨碎，然后再加裂解液。两种方法都是我摸索了好久才摸索出来的，挺好用的。

2016-01-25 23:09 来自 iPhone/iPad客户端

投票 8
收藏 18
打赏
引用
分享
- 微信扫一扫
- 新浪微博
- 丁香客
- 复制网址
举报
- 广告宣传推广
- 政治敏感、违法虚假信息
- 恶意灌水、重复发帖
- 违规侵权、站友争执
- 附件异常、链接失效
- 其他

• 2019规培成绩

蛋白质和糖学

【求助】western blotting如何从组织提蛋白，求详细步骤

提示

丁香园旗下网站

关于丁香园

官方链接

蛋白质和糖学

分享到：

微信扫一扫

【求助】western blotting如何从组织提蛋白，求详细步骤

微信扫一扫

微信扫一扫

微信扫一扫

微信扫一扫

提示

丁香园旗下网站

关于丁香园

官方链接