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蛋白质和糖学

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论坛首页  >  蛋白质和糖学技术讨论版   >  蛋白表达纯化
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【求助】蛋白脱盐柱的选择

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楼主 rrlgod
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这个帖子发布于8年零36天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
关于蛋白质的凝胶过滤（分子筛），有这么一段话 “应该注意的是某些蛋白不适合用凝胶过滤纯化，因为本技术所用树脂有轻度的亲水性，电荷密度较高的蛋白容易吸附在上面”，请问是不是所有的树脂包括交联葡聚糖，琼脂糖等等都是对这种蛋白无能无力吗？ 我试用了G25脱盐柱，确确实实出现了这种问题，蛋白（分子量很大）只会跟盐分一起出来。除了透析（沉淀，怕了）或者超滤（也是有沉淀），还有什么方法方便脱盐吗？
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2013-01-22 22:54 浏览 : 14361 回复 : 11
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yianvv
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  • 2楼
透析和超滤都有沉淀，有个可能是蛋白离开了原来的盐溶液环境就不稳定了，或者这两种操作的条件太剧烈。

一定要除盐的话我有几个想法：

1，调节洗脱用水的PH值，使蛋白所带电荷不与树脂吸附，最好是用挥发性酸调节。

2，用较低浓度的挥发性盐，例如铵盐等在洗脱溶液中形成盐浓度阻止蛋白与树脂吸附。蛋白与原来的盐溶液分开后通过干燥除去水和挥发性盐。

3，新型的除盐树脂也许能解决这个问题，不过我没用过。咨询各树脂公司吧

方法看着就不靠谱，给你个思路吧

祝顺
2013-01-23 09:29
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  • 3楼
正常G25除盐不会出现蛋白和盐一起出来的，除非你的蛋白和盐分子量相当。
你的蛋白很大但还与盐一起出来，应该与你蛋白本身的性质有很大关系。
你的蛋白较大，除盐后有沉淀现象，应该是你蛋白本身的疏水性较强，离子强度去除后，疏水作用自聚。
你的蛋白里面是否可以加点非离子型的表面活性剂，如甘油，糖醇等，应该可以减缓沉淀。
2013-01-23 10:18
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一般不会这样，不过有的蛋白也许本身是有吸附，这样可降低PH，加长柱子，少上样，缓冲液中也可加点甘油等，应该可解决，这样的现象不多见。
2013-01-23 11:30
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