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蛋白质和糖学

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论坛首页  >  蛋白质和糖学技术讨论版   >  蛋白表达纯化
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【求助】蛋白脱盐柱的选择

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楼主 rrlgod
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这个帖子发布于8年零36天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
关于蛋白质的凝胶过滤(分子筛),有这么一段话 “应该注意的是某些蛋白不适合用凝胶过滤纯化,因为本技术所用树脂有轻度的亲水性,电荷密度较高的蛋白容易吸附在上面”,请问是不是所有的树脂包括交联葡聚糖,琼脂糖等等都是对这种蛋白无能无力吗? 我试用了G25脱盐柱,确确实实出现了这种问题,蛋白(分子量很大)只会跟盐分一起出来。除了透析(沉淀,怕了)或者超滤(也是有沉淀),还有什么方法方便脱盐吗?
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2013-01-22 22:54 浏览 : 14361 回复 : 11
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yianvv
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透析和超滤都有沉淀,有个可能是蛋白离开了原来的盐溶液环境就不稳定了,或者这两种操作的条件太剧烈。

一定要除盐的话我有几个想法:

1,调节洗脱用水的PH值,使蛋白所带电荷不与树脂吸附,最好是用挥发性酸调节。

2,用较低浓度的挥发性盐,例如铵盐等在洗脱溶液中形成盐浓度阻止蛋白与树脂吸附。蛋白与原来的盐溶液分开后通过干燥除去水和挥发性盐。

3,新型的除盐树脂也许能解决这个问题,不过我没用过。咨询各树脂公司吧

方法看着就不靠谱,给你个思路吧

祝顺
2013-01-23 09:29
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YOUNGROLLAND
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正常G25除盐不会出现蛋白和盐一起出来的,除非你的蛋白和盐分子量相当。
你的蛋白很大但还与盐一起出来,应该与你蛋白本身的性质有很大关系。
你的蛋白较大,除盐后有沉淀现象,应该是你蛋白本身的疏水性较强,离子强度去除后,疏水作用自聚。
你的蛋白里面是否可以加点非离子型的表面活性剂,如甘油,糖醇等,应该可以减缓沉淀。
2013-01-23 10:18
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一般不会这样,不过有的蛋白也许本身是有吸附,这样可降低PH,加长柱子,少上样,缓冲液中也可加点甘油等,应该可解决,这样的现象不多见。
2013-01-23 11:30
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