【分享】色谱进样顺序 [精华]

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ccyting

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1楼

这个帖子发布于8年零273天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。

连续一直有园友问到在使用色谱分析样品时的进样顺序。我记得以前曾经提到过，大概是没有说清楚。所以再重复说明一次。有一个重点，凡是有关GMP的测试，都需要经过验证。这不只是方法本身，只要在执行方法过程中所有的步驺都要验证。譬如进样的顺序。不是我们坐在那里想象是啥就写出来，也不是别人说啥，我们就去做。完全看自己的方法本身来决定，绝对是有弹性，但是必须经过验证。验证后的程序就是以后我们分析样品的准则。只要在验证范围之内变动是允许的，否则必须重新局部性的验证。

现在把一般的进样的顺序排列如下。

1. 空白（2针或更多，梯度2针，等度多针，做为平衡底线的取得）

2. 标准品1（6 针，系统适应性）

3. 标准品2（3 针）

4. 样品1－1 （3针）

5. 样品1－2（3 针）

6. 标准品1 （1 针）

7. 样品2－1 （3 针）

8. 样品2－2（3 针）

9. 标准品1 （1针）

10. 依此类推

11. 最后一定是标准品1

空白通常就是用溶解样品及标准品的流动相组成。当然有例外，但是必须验证。

标准品1 及2,是用来测试标准品制备的准确度。标准品1的最前6针是用来做为计算反应系数(Response Factor)来测试系统适应性。如果不符合规定，必须立即停止仪器运作。看看毛病在那里，修正后再重头开始。这点美国FDA是严格要求。在分析的进行中，如果发现有任何毛病，必须立即停止。绝对不能说等分析结束后再说。还有就是系统适应除了开头的六针之外，在往下的分析，要随时把标准品1的结果加入再计算。任何时间，有超标必须停止。（如果下班了，第二天上班后，需要立刻检验，然后把不符合系统适应性以后产生的数据，全部废弃。之前符合的，可以保留）。在分析的系列完成后，从头到尾所有的标准品1的数据，必须拿来计算样品的含量及系统适应性。如果超标，那么整个数据不能使用（这点和上面所说，除掉不符合的部分，没有冲突）。通常是有趋向逐渐超标，那整个数据就不能使用了。至于如何取舍，在验证当中应该是可以发现情况的。所以我一直在强调验证的重要性。在验证过程中，会有许多情况出现，可以提供日后分析的参考。

至于两个标准品之间，到底可以放多少样品，完全根据验证来决定。可以减少但是绝对不能增加。在梯度色谱，每针的时间会比较长。所以可以变通。譬如把系统性的6针拆开，不必一次完成。只有一个问题，就是要等到全部样品完成后，才能知道系统适应性是否通过。这就是我们要采取的冒险。每个样品要秤两次，就象标准品一样。每个样品要进3针。这是我在美国33年的做法。不管分析时间长短。如果我是审查员，我绝对如此要求。因为我一直这样做，所以经过这么多年来，从来没有一个官方人员，问过我为何如此做。这就表示是被接受的。如果，你不愿意，那么就要说明，为何你要使用你自己定的方法。譬如一个样品，进样两针，或者一个样品秤两次，每次一针。这个问题，不断有人提出。我也回答过，好象没有多大的反应。我就不再重复了。

希望上面的解说能够帮助大家思考，可以公开讨论。谢谢。

版主111留言:
感谢ccyting老师一如既往的支持分析版