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微生物学和寄生虫学

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【求助】大肠杆菌表达外源蛋白诱导方式有哪些(升温or加IPTG)?现在工业上用哪种诱导方式比较多?为什么?

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楼主 madong5758
madong5758
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这个帖子发布于8年零239天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
大肠杆菌诱导表达外源蛋白一般都有哪些诱导方式,都用的什么质粒?特别是现如今工业上用那种诱导方式比较多,优势在哪里?那位老师给指点下,谢谢!!
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2012-06-04 17:57 浏览 : 5068 回复 : 4
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lh1988
lh1988
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诱导方式一般都是用诱导剂吧,IPTG用的比较多,诱导时间短,蛋白表达也不错。质粒的话也有很多呀,根据不同的抗性基因,不同的酶切位点有很多种的。
2012-06-08 11:54
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huaizheng
huaizheng
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升温,IPTG,乳糖
2012-06-08 14:56
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xiyuki
xiyuki
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  • 4楼
诱导方式大致由启动子决定,但也不排除人为加上某种阻遏物结合位点达到可控性表达的目的。e.coli中常用的启动子有不少,最终效果还是要看目的蛋白是什么,对特定蛋白来说,使用强启动子的表达效果未必最佳,所以很难说哪种表达方式有绝对优势。IPTG诱导的启动子有T7、tac、trc、lac;阿拉伯糖诱导的启动子有pBAD;温度调控的启动子有pL;色氨酸调控的启动子有trp;磷酸盐浓度调控的启动子有phoA;另外老外自己也会尝试组合成其他不常见的杂合启动子,除此之外,不需要诱导的组成型表达也没有被绝对排除采用。目前来说T7启动子具有最高的转录强度和调控严谨性,加上pET系列的载体商业化程度比较高,它在实验室中的使用率可能相对比较高,但是实际应用中综合各种因素考虑(如追求可溶性表达、分泌型表达),往往会选择相对较弱的启动子。
2012-06-11 21:44
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