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求助 海马组织SOD活力问题

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楼主 muziingcz
muziingcz
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这个帖子发布于9年零196天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
问题已关闭悬赏丁当:2
各位前辈好

我每组有六只液氮冻存的大鼠单侧海马组织,是单侧哦

要用

黄嘌呤氧化酶法测定各组大鼠海马组织中SOD的活性
硫代巴比妥酸法测定各组大鼠海马组织中MDA的含量
请问够用吗?
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2011-08-17 15:04 浏览 : 1707 回复 : 2
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Sample preparations
Rats were sacrificed by decapitation and the hippocampi were removed quickly and immediately stored
at ?20 °C. The tissue samples were thawed and homogenized in 1 ml of distilled water. The aliquots of the homogenates were separated and used to determine protein concentration, whereas the remaining homogenates were centrifuged at 3000 s?1 for 10 min. The supernatants were used for enzyme assays. Proteins were determined by the Bio Rad protein assay kit using bovine serum albumin as a standard according to Bradford

SOD assay
In order to measure SOD activity, the method employing xanthine and xanthine oxidase to generate superoxide radicals was used. These radicals react with 2-(4-iodophenyl)-3-(4-nitrophenol)-5-phenyltetrazolium chloride (INT) to form a red formazan dye (Erakovi? et al., 2000). The degree of the inhibition of this reaction was measured to asses SOD activity. The standard assay substrate mixture contained 0.05 mmol/l xanthine 0.05, 0.025 mmol/l INT and 0.94 mmol/l EDTA, in 40 mmol/l CAPS (pH 10.2). The sample aliquot (50 μl) was added to 1.7 ml of the substrate mixture. After 30 s, initial absorbance was recorded and the timer was started. Final absorbance was recorded after 3 min. The reaction was followed at 406 nm. Purified bovine erythrocyte SOD (Randox Laboratories, UK) was used under identical conditions in order to obtain a calibration curve showing the correlation of the inhibition percentage of formazan dye formation and SOD activity. The activity of SOD in the samples was determined from this curve. All samples were diluted with 0.1 mmol/l phosphate buffer pH 7.0 to cause an inhibition between 30 and 60% of the diluent rate (i.e., the uninhibited reaction). One unit of enzyme activity was defined as the quantity of SOD required to cause a 50% inhibition of the absorbance change per minute of the blank reaction (diluent rate).

  • 768_ftp.pdf(97.23k)
2011-08-18 03:22
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楼主 muziingcz
muziingcz
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    丁当
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谢谢您

很详细,但是我没做过实验,想问问够不够,看南京建成的说明书说测SOD活性要6㎎的匀浆就够了

我不知道大鼠一侧海马的重量有多少
2011-08-20 13:47
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