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【求助】请教各位高手,质粒提取老是出现一条杂带,是什么原因呢?

最后编辑于 2011-08-17 · IP 广东广东
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这个帖子发布于 13 年零 325 天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
各位高手帮帮忙啊,我做连接转化一个多月了均未果,请教各位原因。
我的目的基因是1800bp,连入PMX载体(5800bp)后双酶切鉴定正确,但开始没注意2500bp位置有一条很弱的杂带。后来提去内毒素质粒时发现产量怎么也提不高,以前实验室的师兄师姐们也提过这种大片段质粒,产量很高而且没有这条杂带。拿以前师兄做出来过的菌划板提出来的质粒竟然也出现了杂带,之前师兄做时是没有这条杂带的。

怀疑是污染了别的质粒进去了,但我验证了感受态没问题,在LB平板上不长,提质粒没有条带。培养基,平板,摇菌管,氨苄都换了新的。然后又把质粒单切,胶回收线性条带,连接后转化,提出来的质粒还有这条杂带。

实在不知道是什么原因了!难道一个菌可以进入两个质粒吗?看电泳图赶紧好像是两套质粒的条带。请各位高手帮忙分析一下原因,怎么解决这个问题。谢谢!

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泳道1和泳道3:用质粒转化后挑的2个单菌落提取的质粒,泳道3明显是一个杂质粒。泳道2是酶切,但2500bp杂带

不能切开。泳道4又能把泳道3质粒切开。奇怪!难道这个杂带跟泳道3质粒还不是一个东西?

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