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【求助】求助：果蝇成虫头部透射电镜（TEM）制样方法

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nuowei36

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1楼

这个帖子发布于9年零174天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。

待解决问题 悬赏丁当:2 悬赏大厅

目的：观察果蝇成虫眼睛各组成细胞的超微结构。
具体方法：
1.戊二醛前固定
浸入新鲜配制的2.5%戊二醛内（0.2M PBS+25%戊二醛原液+ddH2O，PBS终浓度0.1M），室温2h（第一天晚上9：00-11：00）--> 4℃过夜-->0.1M PBS洗4次，10-15min/次

2. 锇酸后固定（第二天早上8：00开始）
新鲜配制1%室温1.5-2h（避光）-->0.1M PBS洗4次，10-15min/次

3. 脱水
乙醇50% -->70%-->80%-->90%-->100%，各两次，每15min换

4. 浸透
乙醇：包埋剂（spurr）
1：1 -->1h
1：2 -->1h
1：3 -->1h
纯包埋剂-->2h

其中：Spurr配制方法：
NSA： 26g
ERL-4221 10g
DER-736 6g
DMAE 0.4g
猛晃至均匀后，RT静置2h以上。

5. 包埋（第二天晚上11：00结束）
在1.5ml Ep管中进行。
预先聚合200ul底座
之后再加入300ul Spurr，1只脑袋/管。牙签调整位置。
65℃16h.

6. 厚切片观察样品制备是否良好：（第三天下午）
修块，500nm切片，甲苯胺蓝染色。

问题：镜下观察厚切片，果蝇复眼结构凌乱，无法进行超薄切片。

求助各位高手指点迷津或提供观察果蝇成虫眼睛各组成细胞的超微结构的制样方法，感激不尽！

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2011-08-04 09:59 浏览 : 833 回复 : 0

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