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药物化学

关注今日：0 | 主题：192053
论坛首页  >  药物化学讨论版   >  分离提取
该话题已被移动 - thj , 2004-05-22 19:56
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【经验】请教Sephadex LH20的用法 [精华]

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楼主 stars3
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这个帖子发布于17年零226天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
有谁能告诉我Sephadex LH20的用法？（包括层析柱的处理、样品的处理、洗脱剂的选择及使用、层析中的注意事项等）。谢谢！
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    • 不知道邀请谁？试试他们

    换一换
2003-06-12 23:00 浏览 : 65572 回复 : 75
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thj 编辑于 2004-05-26 11:00
  • • 新冠疫苗十问十答，你想知道的都在这里
yxssdoctor
yxssdoctor
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Sephadex LH20使用心得谈：

1 Sephadex LH20是一种价钱较高的填料，使用请千万注意，很贵的哟！（当然，老板有钱就另当别论拉）

2 先讲Sephadex LH20 的原理。 Sephadex LH20的分离原理主要有两方面：以凝胶过滤作用为主，兼具反相分配的作用（在反相溶剂中）。因为凝胶过滤作用，所以大分子的化合物保留弱，先被洗脱下来，小分子的化合物保留强，最后出柱。如果使用反相溶剂洗脱， Sephadex LH20对化合物还起反相分配的作用，所以极性大的化合物保留弱，先被洗脱下来，极性小的化合物保留强，后出柱。如果使用正相溶剂洗脱，这主要靠凝胶过滤作用来分离。

3 再讲Sephadex LH20 洗脱溶剂。听我讲完 第2点后，其实就应该清楚Sephadex LH20 洗脱溶剂因分为两类：反相和正相两种。用得最多的是反相溶剂洗脱，以甲醇－－水系统最为常见，先用水，逐渐增加甲醇比例，最后用100％甲醇冲柱。正相系统以氯仿－－甲醇最为常见，先用50％氯仿－－甲醇，逐渐增加甲醇比例，最后用100％甲醇冲柱。

4 接下来讲样品的处理和洗脱溶剂的选择。如果样品极性大，这选用反相溶剂洗脱（甲醇－－水），样品用最少体积的甲醇－－水（尽可能甲醇少一些）溶解，过滤后，湿法上样（一定要滤喔！要是把Sephadex LH20 堵啦，就得将Sephadex LH20 的柱头部分弃去，很心痛呀）。如果样品极性小，这选用正相溶剂洗脱（氯仿－－甲醇），样品用最少体积的氯仿－－甲醇溶解，过滤后，湿法上样。

5 分离的技巧，最后说说我的使用心得

（1） 流速不可太快，切切不可新急，所谓欲速则不达。

（2）柱子尽可能长， Sephadex LH20 柱长的增加将极大地改善分离，所不要吝惜填料，宁可将填料全装在一根大柱子中，不要将填料装成几根小柱。所谓集中优势兵力，打击敌人。

（3） 馏分一定要接的细，可1／10，或1／20 个保留体积接成一馏分。

（4） 洗脱体积一般为2-3个保留体积，对特殊保留强的化合物，可洗脱5个保留体积。

（5）鞣质成分死吸附严重，如不在乎填料者，可用Sephadex LH20 分鞣质
（6）Sephadex LH20 对黄酮类成分的分离效果极佳，方法很成型，有大量文献参考。
（7）填料反复使用，每次用完，一般可用甲醇将柱子洗干净，然后用下一次分离的起步溶剂将甲醇替换出来，待用

终于写完啦，此手册乃多年体味之心得，望用好。未尽事项日‘后探讨。
2003-06-13 07:39
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yxssmaster 编辑于 2003-06-13 07:41
  • • 酚酞片严重不良反应被禁用？你了解吗？
楼主 stars3
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首先非常感谢你的帮助！再次体会到了丁香园的温暖。象这样的好同志，给加多少分都不为过，强烈建议加分！
本人还有一个问题：我一共买了100g Sephadex Lh20（花了1700元，真的好贵），待分离的样品为水溶性的，极性很大，据报道有效成分可能为多肽或环肽类物质。我如果直接将粗提物上Sephadex柱层析，可行不？如果100g Sephadex大概一次可分离多少样品？多谢！
2003-06-13 23:41
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你是老板还是学生？它是很贵的，我可以考虑一下
2003-06-14 14:33
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