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蛋白质和糖学

关注今日:18 | 主题:441455
论坛首页  >  蛋白质和糖学技术讨论版   >  Western Blot/IP
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【求助】western抗体稀释、孵育的时间与条件的疑惑与不解

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楼主 xiajing_acm
xiajing_acm
常驻站友

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  • 1楼
这个帖子发布于9年零268天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
各位大侠:

你们好!请问做western时抗体一般用什么稀释好,TBST还是封闭液啊?加入一抗后是4°C孵育过夜好呢还是室温下2h好呢?若是4°孵育过夜需要在把摇床上放到冰箱/柜里震荡过夜吗?可是冰箱/冰柜有插座可以提供摇床的电源吗?

还有二抗呢?室温一般孵育多久呢?谢谢啦!小弟新手兼菜鸟,恳请大侠们多多指点!
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2011-05-03 21:46 浏览 : 2866 回复 : 2
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zx314
zx314
检验科
常驻站友

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  • 2楼
我们一般用一抗稀释液(碧云天的),也可以用TBST稀释5%牛奶或5%BSA(加0.1%叠氮化钠)可重复用,孵育温度常选4度,因为抗体回收所以这样。我们放到冷库中摇

二抗室温1h 就行,一般的抗体公司的抗体说明都有介绍
2011-05-03 22:41
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shaman2
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肿瘤内科
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  • 3楼
如果没有cold room,放4度冰箱不摇也行
2011-05-05 04:43
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