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论坛首页 > 蛋白质和糖学技术讨论版 > Western Blot/IP

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【求助】western抗体稀释、孵育的时间与条件的疑惑与不解

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楼主

常驻站友

1楼

这个帖子发布于8年零264天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。

各位大侠：

你们好！请问做western时抗体一般用什么稀释好，TBST还是封闭液啊？加入一抗后是4°C孵育过夜好呢还是室温下2h好呢？若是4°孵育过夜需要在把摇床上放到冰箱/柜里震荡过夜吗？可是冰箱/冰柜有插座可以提供摇床的电源吗？

还有二抗呢？室温一般孵育多久呢？谢谢啦！小弟新手兼菜鸟，恳请大侠们多多指点！

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2011-05-03 21:46 浏览 : 2500 回复 : 2

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常驻站友

2楼

我们一般用一抗稀释液（碧云天的），也可以用TBST稀释5%牛奶或5%BSA（加0.1%叠氮化钠）可重复用，孵育温度常选4度，因为抗体回收所以这样。我们放到冷库中摇

二抗室温1h 就行，一般的抗体公司的抗体说明都有介绍

2011-05-03 22:41

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丁香园准中级站友

3楼

如果没有cold room,放4度冰箱不摇也行

2011-05-05 04:43

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