【原创】细胞培养减少污染的小细节(求票)

holywater
很多实验者都不bother自己洗手,酒精一喷就去实验了。我告诉大家,这极端错误
个人经验是,你仔细洗手比喷酒精效果还好。最好的是肥皂/香皂仔仔细细的洗手,一直到手腕,指甲缝都要洗。洗两遍是一个不错的选择。然后手上喷酒精,
有人穿半截袖的白大褂去做实验,每次我看到都想骂。白大褂袖口要长,最好是袖口扎紧的那种,如果不能的话,把袖口窝向手臂。裸露的手腕部分一定也要喷酒精。戴上手套后手请避免接触工作台外面,如果不得已接触,那再喷酒精。宁可手套酒精味多一些。
拿培养瓶和培养液时候请托下面拿,切忌不要拿瓶颈部位。
每天实验开始时候,超净台/实验间 照20分钟紫外是不错的选择
有一点要注意的是,超净台里面的东西一定要尽量少放。放的越多越容易污染
尽量避免操作时候说话,尤其是严禁细胞房打闹说笑。
每天观察细胞状态,不要总想着save,而是发现细胞不对劲(比如生长缓慢)就立即扔掉。有些(比如支原体)污染,镜检是看不到的,但是细胞的生长异常。所以如果细胞生长异常,那么请扔掉,同时由于支原体空气传播,请检查自己的培养液和培养箱是不是污染。

注意:很多人有个误区,认为进口血清都是贵,其实不然。GIBCO的 NCS,马血清,都比国产的便宜的多,质量好的多。只有FBS才很贵,
很多时候国产血清往往是污染源,所以用国产血清要严格监控状态。
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holywater edited on 2010-07-11 12:32 举报
holywater
自顶一下,有些时候细节决定成败
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19717190
谢谢楼主 很多细节是要多注意 我才养细胞
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franklinding1981
非常实在,谢谢分享。
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孙悟色
值得学习!
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秋千格
ying930035

医师认证小儿眼科

多谢楼主,回想自己平时确实对这些不怎么注意,以后改正!
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沁香
刚开始养细胞,有很多细节都不知道,多谢楼主
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laorentou
多谢细心的楼主啊……
可以改掉好多自己不好的习惯。
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yjq_2004
谢谢楼主分享经验!
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棋子45517945
huangbaoyu0828
谢谢楼主分享!!!
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michealwyd
michealwyd
zhangyun110
entmao
很多都是我们容易犯的,受教了,谢谢。
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wfrainbow
ammszdy
做实验应该戴一次性手套吧,怎么会洗手什么之类的,不明白?
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zhoushaolai99
真的很奇怪,楼主做细胞试验不戴一次性的无菌手套吗?
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第一号
谢谢 楼主分享了!

但夏天做实验时,有事不得以 要穿短袖白大褂的?
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火车二场
holywater wrote:
很多实验者都不bother自己洗手,酒精一喷就去实验了。我告诉大家,这极端错误
个人经验是,你仔细洗手比喷酒精效果还好。最好的是肥皂/香皂仔仔细细的洗手,一直到手腕,指甲缝都要洗。洗两遍是一个不错的选择。然后手上喷酒精,
有人穿半截袖的白大褂去做实验,每次我看到都想骂。白大褂袖口要长,最好是袖口扎紧的那种,如果不能的话,把袖口窝向手臂。裸露的手腕部分一定也要喷酒精。戴上手套后手请避免接触工作台外面,如果不得已接触,那再喷酒精。宁可手套酒精味多一些。
拿培养瓶和培养液时候请托下面拿,切忌不要拿瓶颈部位。
每天实验开始时候,超净台/实验间 照20分钟紫外是不错的选择
有一点要注意的是,超净台里面的东西一定要尽量少放。放的越多越容易污染
尽量避免操作时候说话,尤其是严禁细胞房打闹说笑。
每天观察细胞状态,不要总想着save,而是发现细胞不对劲(比如生长缓慢)就立即扔掉。有些(比如支原体)污染,镜检是看不到的,但是细胞的生长异常。所以如果细胞生长异常,那么请扔掉,同时由于支原体空气传播,请检查自己的培养液和培养箱是不是污染。

注意:很多人有个误区,认为进口血清都是贵,其实不然。GIBCO的 NCS,马血清,都比国产的便宜的多,质量好的多。只有FBS才很贵,
很多时候国产血清往往是污染源,所以用国产血清要严格监控状态。


忍不住还是要argue一下,虽然说得的确很有道理。
1,反复的洗手加喷酒精,为什么不带乳胶手套?夏天还好,冬天如何?男生皮糙肉厚还好,女生细皮嫩肉如何?不要说乳胶手套贵,比起反复的仍细胞便宜得多。
2,白大褂真的有那么干净吗?我一般都不穿白大褂,尤其夏天,热是其一,没必要是其二,穿白大褂那是为了防护自己。
3,超净台照紫外是步骤一,吹20分钟是步骤二,步骤二的重要性远大于步骤一。
4,说话对细胞培养是没有任何影响的,只要不影响到你的操作。大家一起边做细胞,边聊天,其乐无穷。
5,我倒认为save是做细胞的一条基本原则。至于细胞生长异常要具体问题具体分析,有些细胞你是仍不起的。

呵呵, 尖锐些,别介意。
实验小心一些是好,但不要因而缩手缩脚,会吓走一批人。Tongue
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xiaofeiyu_丁1
doc_zxj
我是一个可悲的细胞培养者,细胞把我折磨到疯了,虽然不污染,但是就是长得不好

PS:我只说一点吧,不要直接酒精喷手就操作,戴手套绝对是最佳选择。
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春天的末班地铁
不是很同意楼主的意见。我养细胞从没污染过,从肿瘤细胞到间充质干细胞到神经细胞,一直很成功。现把我的程序说说,希望给学弟学妹一点经验:
1、注意实验室卫生,每周消毒液拖地板一次,擦所有工作台面一次。
2、实验前,实验室、生物安全柜紫外消毒。
3、进入实验室,穿隔离服,戴口罩帽子,戴手术手套。
4、实验中,注意各种细节,不能污染。
4、实验前后,细胞培养瓶一定要烧瓶口。

最后,个人经验:细胞长得慢的,可提高血清浓度;细胞老化快的,可减少血清浓度。
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wjused
wjused
wjused
fly1032
hongyestn
细胞污染我遇到过,大半年没污染的事也遇过,感觉不穿白大褂不是污染的原因,洗手、不戴手套也不是
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cwwlh
大家可能都听过这样说法,很多国外的实验室,养细胞的人很随便,不用穿白大衣,也不用酒精灯,我没有这样的经历,但是我一个刚刚回国的朋友就是这样做的,细胞几乎没污染过,我们讨论了一下原因,最主要的就是空气质量的问题,我们的环境差,污染的几率就会大增。所以平时的时候,我们实验室就是每周都要用过氧乙酸全面清洁,一旦多个人的细胞出现污染的情况,就必须全面清理消毒培养箱,不要把细胞扔了就算了。还有,我硕士养了2年细胞博士养了3年细胞,从来没有带过手套(除非手受伤了),我们的水池就在细胞间门口,洗完手直接进去,实验室的同学都是这么做的,细胞都长得很好。手套也是污染源之一,我们国内大多数实验室没有经济实力购买外科手术用的几块钱1付的手套,很多几毛钱1付的手套都不是无菌的,有的实验室更是节省,1副手套用坏为止,这样反倒增加了污染机会。
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dor22
谢谢楼主的分享
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shuhui446
LZ的有些话还是比较有道理的。
最主要的就是该注意的地方一定要注意到才行。
细胞间里不至于到不能说话的地步,但是嬉笑打闹应该是禁止的。
本来实验室就是工作的地方,还是要严肃一些。
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niaoer
谢谢各位的经验,我最近也开始养细胞,污染了几次,跟师兄师姐们学习经验,发现还是有很多细节是自己没有注意到的。另外带着手套喷酒精进超净台手被烧了好几次,弄得自己现在缩手缩脚老怕污染。就其原因还是觉得自己在操作时的无菌意识不够强,在超净台东西乱放不说 ,还在养细胞的培养皿上晃来晃去, 不污染都是奇迹啊!希望自己的教训能让大家的细胞养的更好!
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wujuan86
wuwxy
实验中是有很多不容易注意到的细节!
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