【求助】bv-2细胞的培养!
我的方案如下:(希望高手们多多提意见,帮忙分析一下)
1.培养基是:DMEM(高糖)+10%FBS+1%双抗
2.因为BV-2是半贴壁半悬浮细胞,所以贴壁的细胞占到80-90%就传代,传代时使用胰酶。消化时间1分30秒(常温),总得感觉消化速度很快。
悬浮的细胞收集,和贴壁细胞混合后离心分瓶。
3.传代比例是1:3。2天换液传代。
刚开始细胞长得很快,感觉一天左右就贴满了。还有很多一串一串悬浮着。可是传了三到四代以后,就发觉细胞不行了,贴壁的少,悬浮着多,形态也不好,碎片越来越多,感觉培养基里面小颗粒样的东西很多,换液后一天左右,就感觉培养基有很多杂质,不干净。细胞不生长,最后就挂了。
昨天复苏的一管,复苏完后在显微镜下观察,细胞圆形的都悬着,感觉状态还行?可是今天去看,贴壁的很少,悬着的不是抱团,就是呈小黑点(一个一个的。感觉没有胞质)。培养基颜色也很红。记得上次复苏一天后培养基就变的有点深黄色了。现在感觉细胞根本不生长。
***高手帮忙啊!再养不好,死的心都有了!:(