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【原创】miRNA用荧光定量PCR检测的流程以及汇总 [精华]

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楼主

qwasd1234

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1楼

这个帖子发布于10年零329天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。

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2010-06-01 14:30 浏览 : 169951 回复 : 358

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qwasd1234 编辑于 2014-11-25 10:15

• 中级考试史上最难一年，你考多少分？快进来估分吧！

楼主

qwasd1234

常驻站友

热

4楼

四、试验操作流程
1、RNA提取
在以上两种RT引物中，Ologod(T)特异引物所需要的RNA尽量是用特殊试剂盒提取的小RNA，而茎环状结构RT引物需要RNA正常提取就好。
另外由于所需样本不同RNA提取方法也不完全相同，普通组织样本和细胞可以研磨用Trizol＋氯仿抽提；血液和植物样本需要前期处理后再用Trizol＋氯仿或用专门的Kit抽提。

2、反转录
确认用Oligod(T)特异RT引物时，RNA需要进行3'Poly(A)加尾处理。
反转录的酶没有特殊要求，操作请按照各自反转录酶的说明书进行就好。这里特别注意的是：反转录过程中用到的RT引物（常规的是随机引物、Oligod(T)和特异引物）是前面提到的Ologod(T)特异引物和茎环状结构RT引物，它们分别属于Oligod(T)和特异引物范畴，在反转录中不需要另外添加其他RT引物。
在确定反转录温度中请特别注意您使用的是哪一种RT引物，而设定相应的反转录温度。

3、荧光定量PCR
优化PCR体系（引物浓度、Mg浓度、dNTP浓度、退火温度等），正常操作。

――――――――The End.――――――

下面有关于以上两种反转录引物的设计的文献两篇，喜欢的自行下载，免费。

2010-06-01 14:37