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楼主

铁杆站友

463楼

蘑菇龟龟
群主最近在做包涵体纯化后免疫的实验用8m 尿素根本溶解不了上样检测只有除目的蛋白以外的杂带 6m盐酸胍也溶解的不是很好但是用1%sds 溶解的很彻底但是很担心免疫兔子的时候会让兔子死亡不知道怎么办很纠结啊~~ 在帖子里面看过n个办法好像不是很试用但是我的目的蛋白表达量很高

SDS如果能溶解，那还好
后期免疫之前可以透析或者超滤置换掉一些SDS
残留一些SDS对免疫的影响不大
我倒是很好奇你什么样的包涵体，6M盐酸胍溶解不了，但SDS却溶解

2013-08-30 13:45

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楼主

laboy

铁杆站友

464楼

zs5772
您好，我现在在做纯化IGY抗体的工作，前期试过了，DEAE柱，ProteinA柱，试过用盐浓度洗脱，PH洗脱，效果都不好，DEAE基本上没有起到分离作用，A柱可以起到分离作用，但是针对性不强，不知道楼主能给点什么建议吗？今天刚申购了纯化IGY专用填料，不知道用的效果如何。

如果要是抗原有多，我是绝对会选抗原偶联的方法，用免疫亲和纯化
如果抗原不多，那就相对麻烦了
蛋黄中的IgY除了特异性的（你免疫后形成的），还有很多非特异性的
我也看到过有专门纯化IgY的亲和填料，利用2 - 巯基吡啶的嗜硫吸附作用
做得好，效果类似proteinA把总IgY（IgG）给纯化出来

2013-08-30 13:54

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楼主

laboy

铁杆站友

465楼

豆香一方
老式你好，我现在实验室有两种电泳槽，一种DYCZ_24DN型垂直电泳槽，另一种水平DYCP—31DN型电泳槽；是否可以用他们来做等电聚焦？另外我的蛋白样品的纯度有关系吗？细胞上清或亲和后的蛋白样，看资料说样品不能含盐，亲和后有buffer啊，怎么做？谢谢！

对等电聚焦不是很熟，不好意思

2013-08-30 13:55

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豆香一方

入门站友

466楼

老师好，刚做过一次真核细胞上清过proteinG柱，后续如何纯化差不多分子量的杂蛋白，进一步得到纯的蛋白，该如何进行下一步？

2013-09-02 09:30

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