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蛋白质和糖学

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论坛首页  >  蛋白质和糖学技术讨论版   >  蛋白表达纯化
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【兴趣小组】抗体纯化及相关应用实验技术讨论帖,欢迎路过 [精华]

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laboy
信息很少

我觉得可以试试proteinA

另外纯化前后的各个样品组分(原液,流穿,上样后洗柱子的平衡液,洗脱液)跑个电泳,有条件再做个ELISA看下

抗体究竟都在哪

我们对过柱后上清进行了ELISA检测,可以确定绝大部分蛋白未能挂柱,仍在过柱后上清里面。
同时尝试使用proteinA预装柱进行实验,蛋白依旧未能挂柱。

目前的主要症结是不结合柱子,是否需在过柱上清里加些Nacl?请教楼主
2012-01-10 14:31
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楼主 laboy
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我们对过柱后上清进行了ELISA检测,可以确定绝大部分蛋白未能挂柱,仍在过柱后上清里面。
同时尝试使用proteinA预装柱进行实验,蛋白依旧未能挂柱。

目前的主要症结是不结合柱子,是否需在过柱上清里加些Nacl?请教楼主

假设你的试验本身都没问题,如果连A和G都挂不了柱,那说明你表达的蛋白的FC结构有问题,要么是异构错构,要么是被蛋白折叠遮挡。

为什么不表达完整IgG蛋白?

如果没有发生这种悲剧的根本性错误,那就是试验操作本身吧

但是proteinA的亲和纯化是一种很宽容的实验,随便FC都能挂住的,制药FC是完好正确的,如果基本挂不住的,你加什么都没用。
2012-01-11 11:32
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cathey
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您好,我最近刚开始看IgY的资料,想问一个问题,所有产蛋鸡都可以用于表达IgY多抗吗?还是像小鼠多抗制备一般用BALB/c ,IgY制备也有比较常用或特定的蛋鸡品系。
2012-02-01 09:19
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cathey
您好,我最近刚开始看IgY的资料,想问一个问题,所有产蛋鸡都可以用于表达IgY多抗吗?还是像小鼠多抗制备一般用BALB/c ,IgY制备也有比较常用或特定的蛋鸡品系。

上学那会做过这个玩意,就是用普通家养的鸡,所谓的笨鸡哈

不记得有什么特别的讲究,不过可以查下文献资料
2012-02-19 17:50
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