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蛋白质和糖学

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论坛首页  >  蛋白质和糖学技术讨论版   >  蛋白表达纯化
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【兴趣小组】抗体纯化及相关应用实验技术讨论帖，欢迎路过 [精华]

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楼主 laboy
laboy
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这个帖子发布于10年零272天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
2009年丁香园的得分统计中，竟然没有一个精品帖子是我发的（虽然参与了很多），惭愧ing

为了杯具不再发生，也是向坛子里chromatography等前辈学习，斗胆发此贴，和大家分享经验和教训:p

在学校做了2年，在一家抗体公司做了5年多的抗体和抗原纯化，经过我的手或者下面员工的手，纯化过的抗体不下几千个了，如果以重量计估计要以斤算……

单抗，多抗

IgG IgM IgY

上清 血清 腹水 蛋黄

疏水 抗原免疫亲和 嗜硫 proteinA proteinG 硫酸铵沉淀 辛酸萃取

……
都做过一些

在抗体纯化或者抗体相关技术方面有需要帮助的战友们（也时常有战友私下发短消息给我，不如发出来，大家一起讨论），欢迎发帖来讨论，大家互相学习，共同提高

考虑到很多新接触抗体纯化的朋友，都问我要protocol，我就上传一个最基础也是最经典的handbook吧

推荐这个GE公司的 《antibody handbook》不代表我推荐里面的所有试剂和设备。
纯化不是做衬衣，没有万金油protocol

  • 18103746AC.pdf(1077.25k)
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2010-01-26 16:41 浏览 : 84880 回复 : 504
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laboy 编辑于 2011-11-09 14:51
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笑百
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我最近也在做抗体纯化，正苦于没人问。看来楼主是抗体纯化的高手啊，以后要多请教了。

先问个问题，从血清纯化IgG，需要经过哪些纯化步骤？我现在是用辛酸-硫酸铵沉淀，然后过DEAE-纤维素阴离子交换柱，感觉效果不太好。
2010-01-26 17:30
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楼主 laboy
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笑百
我最近也在做抗体纯化，正苦于没人问。看来楼主是抗体纯化的高手啊，以后要多请教了。

先问个问题，从血清纯化IgG，需要经过哪些纯化步骤？我现在是用辛酸-硫酸铵沉淀，然后过DEAE-纤维素阴离子交换柱，感觉效果不太好。

高手不敢当啊，就是纯化过不少抗体而已
纯化抗血清，如果有纯抗原（0.5mg以上）都推荐做抗原免疫亲和纯化，其次是proteinA的亲和纯化。再其次是用硫酸铵分级沉淀。
2010-01-27 08:11
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skykiller
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本来我很有些反对那个年终排名的，没想到能把laboy引出来开这个帖子，有幸！

关于抗体纯化，看起来很简单，protocol一堆一堆的，当然，如果只是纯化一点少量抗体做试验室的试验用，抗体纯化很简单。

但实际上做过几十个或上百个以上抗体纯化的老手就会知道，抗体纯化不简单！甚至比那些大肠杆菌表达的重组蛋白要难。做商品化应用的抗体纯化同行们也有此体会吧？
难有几个方面。

例如原料的差异。无论是单抗腹水还是多抗血清，不能保证每批原料的相同，有时候甚至差异很大。当一批纯化抗体出现问题时，是原料原因引起还是纯化过程引起的排查就很有得受。而重组的E.Coli.或酵母蛋白相对要均一性的多。

例如抗体活性的保持。对重组E.Coli.或酵母蛋白，如果是可溶蛋白，其活性往往较稳定，只要不降解，变化不大。而抗体却表现的很微妙。缓冲液、温度或纯化用柱的细微变化往往会带来差异较大的结果。

非常高兴laboy开这个帖子。我先来问一个问题。
在单抗腹水前处理过程中，由于免疫方式的不同，有些腹水往往含有较多的石蜡油，造成过滤困难，而且会堵纯化的在线过滤器和柱头，也会粘附在纯化胶上，如何通过前处理过程去除呢？希望对抗体的损失不大。
2010-01-27 08:59
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