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【求助】关于GFP免疫荧光的问题？

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楼主

丁香园准中级站友

1楼

这个帖子发布于10年零48天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。

本人在作GFP标记的干细胞大鼠体内示踪，欲作GFP的冰冻切片，可是现在有的抗体却是：
specificity：human
application：WB
host：rabbit

这样我的双标没法做，因其他抗体也是兔来源的，加之有特异性及应用方法的限制，搞得我很郁闷，想请教一下，
1. GFP有种属特异性吗？GFP不是都来源与水母吗？怎么还有种属特异性呢？一定需要抗大鼠的抗体吗？

2. 另外GFP不是可以自身被激发出荧光吗？为什么还要加一抗，二抗啊？

3. 这种WB的抗体到底能否用于冰冻切片的免疫荧光呢？

由于在这方面是新手，搜索了以前版内讨论的相关问题还是没有找到答案，在这里麻烦大家帮忙解答，谢谢！

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2009-10-24 17:22 浏览 : 7542 回复 : 11

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丁香园荣誉版主

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4楼

小游医
想请教一下，
1. GFP有种属特异性吗？GFP不是都来源与水母吗？怎么还有种属特异性呢？一定需要抗大鼠的抗体吗？

2. 另外GFP不是可以自身被激发出荧光吗？为什么还要加一抗，二抗啊？

GFP没有种属性，是你们实验设计是引入的标志，用来示踪的，抗GFP的抗体不一定要大鼠来源的，可用鼠源的单抗。

GFP蛋白是可以被激发荧光的（干细胞系是体外能发荧光的，检查过吧？），但在组织切片中是否容易观察，我没经验。
你的试验再用免疫荧光，可能是为了加强荧光，便于组织观察。

2009-10-25 11:50

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常驻站友

2楼

WB的抗体一般不能用来做免疫荧光的

2009-10-24 18:49

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楼主

丁香园准中级站友

3楼

谢谢inez 战友
其它两个问题还请帮忙解答一下？

2009-10-25 09:14

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