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免疫学

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论坛首页  >  免疫学讨论版   >  免疫细胞技术
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【求助】关于GFP免疫荧光的问题?

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楼主 聂春磊
聂春磊
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这个帖子发布于10年零48天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
本人在作GFP标记的干细胞大鼠体内示踪,欲作GFP的冰冻切片,可是现在有的抗体却是:
specificity:human
application:WB
host:rabbit

这样我的双标没法做,因其他抗体也是兔来源的,加之有特异性及应用方法的限制,搞得我很郁闷,想请教一下,
1. GFP有种属特异性吗?GFP不是都来源与水母吗?怎么还有种属特异性呢?一定需要抗大鼠的抗体吗?

2. 另外GFP不是可以自身被激发出荧光吗?为什么还要加一抗,二抗啊?

3. 这种WB的抗体到底能否用于冰冻切片的免疫荧光呢?

由于在这方面是新手,搜索了以前版内讨论的相关问题还是没有找到答案,在这里麻烦大家帮忙解答,谢谢!
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2009-10-24 17:22 浏览 : 7542 回复 : 11
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alishang
alishang

丁香园荣誉版主

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  • 4楼
小游医
想请教一下,
1. GFP有种属特异性吗?GFP不是都来源与水母吗?怎么还有种属特异性呢?一定需要抗大鼠的抗体吗?

2. 另外GFP不是可以自身被激发出荧光吗?为什么还要加一抗,二抗啊?



GFP没有种属性,是你们实验设计是引入的标志,用来示踪的,抗GFP的抗体不一定要大鼠来源的,可用鼠源的单抗。

GFP蛋白是可以被激发荧光的(干细胞系是体外能发荧光的,检查过吧?),但在组织切片中是否容易观察,我没经验。
你的试验再用免疫荧光,可能是为了加强荧光,便于组织观察。
2009-10-25 11:50
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inez
inez
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  • 2楼
WB的抗体一般不能用来做免疫荧光的
2009-10-24 18:49
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楼主 聂春磊
聂春磊
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谢谢inez 战友
其它两个问题还请帮忙解答一下?
2009-10-25 09:14
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