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再生医学与组织工程

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【求助】IPS细胞的转染 [精华]

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铁杆站友

36楼

非常感谢您的回答。下次做的时候我再试试。
还有一个问题，1：2，1：4，1：8的比例是什么意思呢？1：2是说是感染后的细胞铺一半到MEF上么? 1：4 就是1/4？我一般6-cm 上铺10（5）的细胞，最终能拿到3－5个左右的ips。

aaron928 wrote:
按照他所采用的方法，那样数目的感染细胞几天后就会生长过密，所以我一般感染后24-48小时就按照1：2，1：4，1：8的比例将它们都转到MEF细胞上面去，结果大约18-22天左右可以看到克隆，你也可以反复感染2-3次左右，以提高重编程效率。尽信书不如无书，要尊敬先驱，但不要盲从，我当时在美国就是因为这样，被一篇Science的文章真整整坑了十个月。
iPS细胞克隆一旦形成，我个人认为在形态学上基本上看不出与ES细胞的任何区别，但在基因表达谱和分化效率上会有所区别，最近威斯康辛大学的张苏春教授在PNAS发的一篇文章就提出iPS与ES细胞在神经分化的效率就存在显著差别，但根据我们的研究结果表明，iPS的分化效率跟你所选用的转录因子是有关系的，有些iPS细胞株完全可以达到跟ES细胞相同的分化效率。

2010-04-27 21:53

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丁香园中级站友

37楼

fyq8014
非常感谢您的回答。下次做的时候我再试试。
还有一个问题，1：2，1：4，1：8的比例是什么意思呢？1：2是说是感染后的细胞铺一半到MEF上么? 1：4 就是1/4？我一般6-cm 上铺10（5）的细胞，最终能拿到3－5个左右的ips。

是的，刚开始做得时候不知道什么样的密度才是最佳密度，过密或过稀都不利于iPS的形成，所以可以设置几个梯度。

2010-04-27 21:58

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songhui19830730

入门站友

38楼

aaron928 你说你用的密度梯度是1：2，1：4，1：8，想问一下，你做体细胞感染是用多大的皿，做饲养层用多大的皿

2010-05-09 09:49

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丁香园中级站友

39楼

体细胞感染用3.5cm皿，做饲养层用10cm皿,但这个不是唯一准则，可以根据实际需要选择。

2010-05-09 12:17

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