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细胞技术

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论坛首页  >  细胞技术讨论版   >  【求助】
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【求助】流式测细胞周期为什么只出现单个峰?在线等,谢过大家了

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楼主 huweilin
huweilin
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这个帖子发布于11年零139天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
小女子刚开始接触流式细胞,做好细胞各期同步化后用PI单染测量细胞各周期百分数,可出来的结果都只有一个峰,看样子应该是G0/G1期。随后的S,G2/M均很少,特别是G2/M几乎没有出现,每个样本都是如此。不知道是哪步实验出错了。还望大侠们指教:)
我用的是联科生物的试剂盒,就只有一瓶染液
步骤如下:
收集细胞,离心去上清,轻拍管子使重悬,加1ML PBS
将所有液体转移至4ML-20度乙醇中,以最大速度漩涡震荡,-20度放置5-15分钟
离心去上清,加5MLPBS,细胞补水15分钟
离心去上清,加1ML DNA staining solution 室温避光孵育30分钟,送流式

染液保存在4度冰箱,不知里面是否含RNA酶,含RNA酶可放于4度吗?

感谢大家赐教
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2009-09-13 10:56 浏览 : 4466 回复 : 4
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楼主 huweilin
huweilin
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  • 4楼
wlnju
如何的同步化?首先确认你的细胞已经从G0/G1期出来了,其次G2 S期的细胞本来就比G1的要少,你可以加个G2期阻滞的化合物做个对照,如果有必要的话。
其次单染需要乙醇固定的时间长些,起码2小时以上,过夜也没问题。再摸下条件吧。


谢谢,我用的是同步化试剂盒,可同步在G0,G1,M,G2,S各期,我是拿PI单染测下这个试剂盒的效率的,可是做出来的图都一样,而且空白对照也只有一个峰,所以感觉是出问题了
2009-09-14 15:38
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楼主 huweilin
huweilin
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  • 5楼
wm_ni
1、乙醇不能用纯乙醇,需要70%的乙醇。
2、乙醇固定时间为30分钟以上。
其它问题不是很大。
我之前总结过两个方法: http://www.flowcyto.cn/question.php?qid=207


我加过1ML PBS后乙醇的终浓度为80%,浓度可能差不多,时间是少了点,谢谢啦。会不会是流式机器没调好的原因?我看那个实验员也不太懂。
2009-09-14 15:41
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楼主 huweilin
huweilin
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  • 7楼
wm_ni
浓度差不多?实验上的因素差一点,结果就差很多了。
当然,是不是流式机器的问题还说不好,你最好把图片或相关参数放上来。


她给我的结果,我觉得弄得很不专业,流式细胞仪是其他实验室的,他们专人测,那个测的人是新手。图在附件,我截图的
2009-09-14 18:49
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