• 论坛首页
  • 我的丁香客
  • 找人
    查找好友
  • 更多
    丁香园
    丁香通
    丁香人才
    丁香会议
    丁香搜索
    丁香医生
    丁香无线
    丁香导航
    丁当铺
    文献求助
    医药数据库
    丁香诊所
    来问医生
登录 注册

蛋白质和糖学

关注今日:4 | 主题:441194
论坛首页  >  蛋白质和糖学技术讨论版   >  蛋白表达纯化
  • 发帖
    每发1个新帖
    可以获得0.5个丁当奖励
  • 回帖

分享到:

  • 微信

    微信扫一扫

  • 微博
  • 丁香客
  • 复制网址

【专题讨论】^^^^^不同的目的蛋白在pGEX上表达纯化后,均遇到了一条杂带,看着很诡异(附图)^^^^^ [精华]

  • 只看楼主
  • 页码直达:
  • 直达末页
楼主 laboy
laboy
铁杆站友

  • 154
    积分
  • 122
    得票
  • 614
    丁当
  • 36楼
shouhoum
我用的PGEX载体 目的蛋白GST-Target 36KD
表达菌株是Rosetta gami 2。 30度诱导五小时 GST柱子纯化

发现纯化后是两条带。有26KD左右的带 而且量大于目的蛋白的带。开始怀疑是空载体污染,可是经过酶切发现没有质粒污染。
包涵体纯化发现有微弱目的蛋白,好像没有26KD的条带。请给点建议,如何让我纯化出目的的36KD的条带啊????!!!!!

你这个恐怕是目的片段在表达时就被降解了

解决的方法只能是改诱导条件,或者做成包涵体,这样不容易降解

另外发现一个有意思的事,你怎么能用GST柱子来纯化GST标签蛋白的包涵体呢??当然挂不住

要在C端加一个6HIS,然后用NI柱
2009-12-28 15:46
  • 投票
  • 收藏
  • 打赏
  • 引用
  • 分享
    • 微信扫一扫

    • 新浪微博
    • 丁香客
    • 复制网址
  • 举报
    • 广告宣传推广
    • 政治敏感、违法虚假信息
    • 恶意灌水、重复发帖
    • 违规侵权、站友争执
    • 附件异常、链接失效
    • 其他
  • • 世卫组织称新冠病毒变异速度比流感慢
shouhoum
shouhoum
入门站友

  • 0
    积分
  • 1
    得票
  • 60
    丁当
  • 37楼
laboy
你这个恐怕是目的片段在表达时就被降解了

解决的方法只能是改诱导条件,或者做成包涵体,这样不容易降解

另外发现一个有意思的事,你怎么能用GST柱子来纯化GST标签蛋白的包涵体呢??当然挂不住

要在C端加一个6HIS,然后用NI柱

我现在准备37度诱导,菌的表达量低,打算诱导8小时或过夜。请问,对诱导条件有花有什么经验吗??谢谢,时间很紧
刚才说错了,使用的试剂盒 专门亲和GST的
2009-12-28 15:54
  • 投票
  • 收藏
  • 打赏
  • 引用
  • 分享
    • 微信扫一扫

    • 新浪微博
    • 丁香客
    • 复制网址
  • 举报
    • 广告宣传推广
    • 政治敏感、违法虚假信息
    • 恶意灌水、重复发帖
    • 违规侵权、站友争执
    • 附件异常、链接失效
    • 其他
  • • 调查:你们医院发年终奖吗?
楼主 laboy
laboy
铁杆站友

  • 154
    积分
  • 122
    得票
  • 614
    丁当
  • 38楼
shouhoum
我现在准备37度诱导,菌的表达量低,打算诱导8小时或过夜。请问,对诱导条件有花有什么经验吗??谢谢,时间很紧
刚才说错了,使用的试剂盒 专门亲和GST的

GST柱子,无法亲和包涵体形式的GST融合蛋白。

减轻降解,最好是从缩短诱导时间和降低诱导温度着手吧
2009-12-28 15:59
  • 投票
  • 收藏
  • 打赏
  • 引用
  • 分享
    • 微信扫一扫

    • 新浪微博
    • 丁香客
    • 复制网址
  • 举报
    • 广告宣传推广
    • 政治敏感、违法虚假信息
    • 恶意灌水、重复发帖
    • 违规侵权、站友争执
    • 附件异常、链接失效
    • 其他
  • • 首张“新冠患者分子全景图”
shouhoum
shouhoum
入门站友

  • 0
    积分
  • 1
    得票
  • 60
    丁当
  • 39楼
laboy
GST柱子,无法亲和包涵体形式的GST融合蛋白。

减轻降解,最好是从缩短诱导时间和降低诱导温度着手吧

我们另外还有一个纯化包涵体 透析重折叠的试剂盒,所以经常纯化包涵体中的蛋白。目前我就想提高温度和时间,使尽可能多的目的蛋白进入包涵体而不被降解。然后纯化透析包涵体中的目的蛋白。初步打算如此
2009-12-28 16:03
  • 投票
  • 收藏 1
  • 打赏
  • 引用
  • 分享
    • 微信扫一扫

    • 新浪微博
    • 丁香客
    • 复制网址
  • 举报
    • 广告宣传推广
    • 政治敏感、违法虚假信息
    • 恶意灌水、重复发帖
    • 违规侵权、站友争执
    • 附件异常、链接失效
    • 其他
  • • 刚从死亡线上拉回来的糖足患者,要求出院,要求老公还她十几年青春……

关闭提示

需要2个丁当

丁香园旗下网站

  • 丁香园
  • 用药助手
  • 丁香通
  • 文献求助
  • 丁香人才
  • 丁香医生
  • 丁香导航
  • 丁香会议
  • 手机丁香园
  • 医药数据库

关于丁香园

  • 关于我们
  • 丁香园标志
  • 友情链接
  • 联系我们
  • 加盟丁香园
  • 版权声明
  • 资格证书

官方链接

  • 丁香志
  • 丁香园新浪微博
引用回复