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关于oligo的退火的问题请教

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楼主

littlesmiler

常驻站友

1楼

这个帖子发布于16年零106天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。

合成了70bp的两条链，不知道该怎么退火，在网上搜索了一下，以及看了些文献，方法都不同，想请教已经做成功的朋友，你们的退火方法是怎样的？

另外，有什么退火的缓冲液，不知道是怎么配置的？

谢谢！

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2004-08-18 15:44 浏览 : 5751 回复 : 14

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yannh320

丁香园准中级站友

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2楼

首先将合成的双链分别用TE稀释成25uM，然后按以下体系做：
寡核苷酸1链（25uM）2ul
寡核苷酸2链（25uM）2ul
0.5M Nacl 6ul
水 20ul
总反应体系30ul，瞬时离心，PCR仪上80度3分钟，慢慢降到室温。连接时取1-2ul即可。
我最近在做siRNA，合成的的互补链退火后做连接，不需要退火的缓冲液效果一直很好，你可以试一下，祝你好运！

2004-08-18 18:32

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楼主

littlesmiler

常驻站友

3楼

yannh320
首先将合成的双链分别用TE稀释成25uM，然后按以下体系做：
寡核苷酸1链（25uM）2ul
寡核苷酸2链（25uM）2ul
0.5M Nacl 6ul
水 20ul
总反应体系30ul，瞬时离心，PCR仪上80度3分钟，慢慢降到室温。连接时取1-2ul即可。
我最近在做siRNA，合成的的互补链退火后做连接，不需要退火的缓冲液效果一直很好，你可以试一下，祝你好运！

谢谢，我去试试：）

另外，你的实验也是用shRNA么？效果怎样？我师兄一直做不好，我都很担心。

2004-08-18 19:38

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• 上海多所学校通知医护人员子女不能到校上课

zhuti

常驻站友

4楼

我还想问一下：
1。80度3分钟，慢慢降到室温？在前面需要变性一下吗？防止单链形成二级结构？
2。合成的双链如果只有30bp退火后可以酶切吗？
3。如果不能，能不能直接通过退火形成粘末端呢？

2004-08-18 19:42

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