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细胞学与信号转导

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【讨论】microRNA研究思路交流贴（如讨论具体试验技巧，请前往核酸基因版） [精华]

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楼主

丁香园荣誉版主

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1楼

这个帖子发布于11年零317天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。

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版主留言:

感谢zhujoker战友开辟此帖。但是个人的精力和能力毕竟是有限的，希望大家不要只顾提问题，等着他人来解答。
希望每个关注此帖的战友尽自己之所知，积极参与答复别人的问题，方不负楼主开此帖之良苦用心。本帖中，只要积极答复其他战友问题的，或者提出自己原创见解的，加分从优！

同时希望大家少讨论一些试验技术方面（如试剂、试验操作等等）的问题， 例如qipeng1225,onlove001,maomaolp1983这三个战友的问题不宜在此讨论，此类试验操作问题可以前往”核酸基因技术讨论版“交流。这里的帖子，希望多谈思路、理论。
实验操作和试剂购买之类的帖子，版主将自行删除，不予通知！

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本人是做miRNAs相关的，为了大家交流方便，特发此贴。其目的有下：
1.本人对miRNAs的研究很感兴趣，希望大家提出实验中的问题以完善自己的知识体系。
2.本着丁香园的丁香人秉承“我为人人，人人为我”的互助精神，我愿意把自己所知道的和了解到的最新研究进展和方向与大家一起分享。
3.给大家提供一个关于miRNAs研究的交流平台。

希望大家积极参与！

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2009-04-20 11:57 浏览 : 103057 回复 : 295

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freecell 编辑于 2009-09-05 06:02

• 落枕诊治

楼主

丁香园荣誉版主

+1 积分

热

2楼

有人问我关于“最近发现外周血循环miRNAs的研究似乎是未来的一个潮流，你怎么看？做这方面的研究有希望么?”
根据我的了解，对于血液中miRNAs的稳定存在已经早就有人报道过，并且比较有借鉴意义的一篇文献是“Circulating microRNAs as stable blood-based markers for cancer detection”，此片文献主要讲述了通过加尾的方法对所以小RNA分子进行研究发现血浆中的内源miRNA分子是稳定的，并且检测了胰腺癌组织中特异性的miRNAs升高与血浆中的内源miRNA分子的升高具有正比关系，所以血清或者血浆中miRNA作为生物标志物的检测。但是反过来说，理想的循环miRNA标志物是在肿瘤细胞中等或高水平表达, 在健康人血浆中检测不到或低水平存在.到底是miRNAs改变引起癌变还是癌变后引起组织的坏死导致的miRNAs溢出还是miRNAs从癌组织中分泌出来都是一些挑战性的问题。并且对于miRNAs的研究、肿瘤的生物学以及癌症的治疗都其着重要的作用。
很显然的是，miRNAs的研究具有广阔的前景！

2009-04-20 19:10

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楼主

丁香园荣誉版主

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5楼

请问一下你需要离心的作用是什么呢？血清血浆等体液中的循环miRNAs含量较少，这点我认可。但是对于血液或者血清的RNA提取你应该清楚吧，或者现在有专门的试剂盒可以提取miRNAs。但是对于你说的“血清血浆等体液中的循环miRNAs含量较少，提取其中的RNA或miRNA时需要的体液较多”是不成立的吧，因为不管你多少你最后都是用PCR验证的啊，扩增40个循环我想怎么都能检测出来吧。
还有就是你说的“好像大多数10-15ml的离心管都不能承受高速离心”我不占成，因为我们用的没有多少管子不能承受高速离心啊。除非是超速需要特殊的。

2009-04-21 12:17

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• 什么是藏象理论？

楼主

丁香园荣誉版主

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8楼

我没有做过原代T细胞，但是我可以给你一些关于在miRNAs方面的疑惑提出自己的看法。首先miRNAs不同于编码基因，仅仅过表达来观察其现象，miRNAs的过表达一般来说都是需要找到下游的一个或者多个target，观察target的表达情况。因为miRNAs的最终作用点还是需要功能性蛋白质来完成。对于miRNAs的过表达我建议你做病毒感染吧，因为就我自己的实验看来用一些质粒表达不出来，可能有启动子特异性或者其他因素的影响。对于miRNAs的konckdown我想这也是你过表达成立的正反论证，现在miRNAs的konckdown方式很多，但是有很多的确是不成熟的。但是对于一个新兴领域，不可能就直线走下去的，所以还有很长的路需要我们一起努力开拓。
而对于你具体的实验设计只能根据你的细胞的miRNAs和蛋白水平进行相应的一些预实验后开展，就层面意义上的说如何设计你的课题是不可能的。

2009-04-21 13:56

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