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形态学与生理生化讨论版
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【求助】SDS胶问题
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楼主
vivi111
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丁当
1楼
这个帖子发布于
10年零323天
前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
请问跑SDS胶时，煮样加Loading buffer的主要作用是什么？如果不煮蛋白还能跑胶吗？
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不知道邀请谁？试试他们
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2009-03-06 10:01
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丁当
2楼
在跑SDS电泳是使用loading buffer的作用主要有两个：
1:在电泳的过程中可以有个参照物，知道蛋白跑了多远。
2：一般loading buffer中含有sds和巯基乙醇等强还原剂，通过煮沸使蛋白质充分变性。如果你跑的是变性的，就肯定是要煮的。
采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测蛋白质分子量时,只有完全打开二硫键, 蛋白质分子才能被解聚,SDS才能定量地结合到亚基上而给出相对迁移率和分子量对数的线性关系.因此在用SDS处理样品同时往往用巯基乙醇处理,巯基乙醇是一种强还原剂,它使被还原的二硫键不易再氧化,从而使很多不溶性蛋白质溶解而与SDS定量结合.
有许多蛋白质是由亚基(如血红蛋白)或两条以上肽链(如胰凝乳蛋白酶)组成的,它们在SDS和巯基乙醇作用下,解离成亚基或单条肽链,因此这一类蛋白质,测定时只是它们的亚基或单条肽链的MW.
已发现有些蛋白质不能用SDS-PAGE测定分子量.如电荷异常或构象异常的蛋白质,带有较大辅基的蛋白质(某些糖蛋白)以及一些结构蛋白,如胶原蛋白等.
一般至少采用两种方法测定未知样品的分子量,互相验证.
2009-03-07 13:20
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3楼
还原型5XSDS上样缓冲液（loading buffer）
1M Tris•HCl pH6.8 5ml，
β-巯基乙醇 1.2ml（使蛋白还原变性，之构象改变，更易与SDS结合）
SDS 2g（消除蛋白电荷干扰，与蛋白结合构象改变，成杆状，借此反映蛋白分子量大小）
0.05％溴酚蓝 1-2ml（指示剂）
50％甘油 16ml（比重剂）
加蒸馏水定容至40ml
2009-03-09 10:07
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