【求助】我的HUVEC为什么都死掉了？

请教各位园友，请帮我分析一下HUVEC死亡原因好吗？

情况是这样，我的传代HUVEC从别人处拿回后，用含20%小牛血清M199第一次传代，细胞长的不错，就是快了些，48小时用15%小牛血清M199传第二代，可细胞生长却直线下降，换液也不行，最后都死掉了。

我以前没有养过这个细胞，自己仔细想想，是第二次传代消化时间过长（约1分钟），因为当时发现有细胞已经飘起来了，还是传代间隔时间太短造成的？或者还有其他原因？好困惑好郁闷啊，请各位有经验的园友指点迷津，要不这个年过不好了，多谢多谢了。