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【求助】如何用NGF诱导PC12细胞分化

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楼主

铁杆站友

1楼

这个帖子发布于12年零211天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。

我们最近在做用NGF诱导PC12细胞分化的试验。刚才在园子里转了一大圈，想找到详细的诱导用培养液的组分及诱导方法，感觉都不是很清楚。只是说NGF浓度是50~100ng/ml。培养液还用原来的DMEM85%,FBS5%,HS10%，直接往里面加NGF就可以了吗？还有接种密度多大合适？
我们这样试过，结果细胞增殖很严重，尽管有部分细胞分化，但增殖细胞覆盖在上面影响观察。还试着用含1%HS的DMEM/F12先培养24小时后再加入NGF,结果细胞倒是不增殖了，第二天观察挺好的，第三天就开始大批死掉了，也不知是什么原因。
国内文献中都没有具体说用NGF诱导PC12分化是培养基的成分。国外文献报道用DMDM+1%FBS or 1%HS。我们这样试过，发现细胞不用加NGF就可以分化，这又是为什么？
困惑中..........,请指教，谢谢！

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2008-08-03 23:52 浏览 : 5977 回复 : 7

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dengnora

铁杆站友

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2楼

以前虽然没有专门诱导PC12分化，但是传代时发现，微贴壁的PC12很容易漂浮，却并没有死掉，传到新的培养瓶后可以照样贴壁生长。但是贴壁较好的细胞用酶消化下来进行传代，即使没有NGF也容易发生分化。鉴于PC12喜欢像叠罗汉一样堆着长，建议战友用较低的密度接种，基本控制在24hr后瓶底还有空间，这样覆盖的细胞会较少，利于观察。祝实验顺利。

2008-08-04 11:53