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【求助】如何用NGF诱导PC12细胞分化

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楼主 caocl
caocl
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这个帖子发布于12年零211天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
我们最近在做用NGF诱导PC12细胞分化的试验。刚才在园子里转了一大圈,想找到详细的诱导用培养液的组分及诱导方法,感觉都不是很清楚。只是说NGF浓度是50~100ng/ml。培养液还用原来的DMEM85%,FBS5%,HS10%,直接往里面加NGF就可以了吗?还有接种密度多大合适?
我们这样试过,结果细胞增殖很严重,尽管有部分细胞分化,但增殖细胞覆盖在上面影响观察。还试着用含1%HS的DMEM/F12先培养24小时后再加入NGF,结果细胞倒是不增殖了,第二天观察挺好的,第三天就开始大批死掉了,也不知是什么原因。
国内文献中都没有具体说用NGF诱导PC12分化是培养基的成分。国外文献报道用DMDM+1%FBS or 1%HS。我们这样试过,发现细胞不用加NGF就可以分化,这又是为什么?
困惑中..........,请指教,谢谢!
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2008-08-03 23:52 浏览 : 5977 回复 : 7
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dengnora
dengnora
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  • 2楼
以前虽然没有专门诱导PC12分化,但是传代时发现,微贴壁的PC12很容易漂浮,却并没有死掉,传到新的培养瓶后可以照样贴壁生长。但是贴壁较好的细胞用酶消化下来进行传代,即使没有NGF也容易发生分化。鉴于PC12喜欢像叠罗汉一样堆着长,建议战友用较低的密度接种,基本控制在24hr后瓶底还有空间,这样覆盖的细胞会较少,利于观察。祝实验顺利。
2008-08-04 11:53
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楼主 caocl
caocl
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  • 3楼
感谢dengnora的热情答复。“以前虽然没有专门诱导PC12分化,但是传代时发现,微贴壁的PC12很容易漂浮,却并没有死掉,传到新的培养瓶后可以照样贴壁生长”。深有同感。
现在想知道确切的用NGF诱导PC12细胞分化的方法。期待中。。。。。。
2008-08-04 18:45
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我用的办法是1%FBS,50ng/mlNGF的1640培养基进行诱导分化。同样是在第3天左右开始出现细胞死亡,有大片的细胞碎片。头疼中····
2009-04-03 11:24
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