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【讨论】HPLC理论塔板数对含量测定及有关物质测定的影响？ [精华]

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楼主

铁杆站友

36楼

yuzhilin

二，何时确定理论塔数。一般来讲，这个只有统一标准时进行完通用性验证后制订才有意义。但对于自己研究时初订时，通常只有使用高柱效柱确定主峰旁有小峰时（主峰可不一定是最大峰，应该是研究谁，谁就是主峰，包括已知杂质），再使用同类型低柱效的柱子，看到多低的板数，基本达到无法分离的程度，那这个板数就可初定为最低要求的理论板数。当然，要订入标准还要经过通用性验证。

谢谢各位的讨论，尤其是yuzhilin战友，受益匪浅！
在请教一下，您所指的“通用性验证”能再讲详细些吗？（没做过这方面工作，以前写申报资料时也没对塔板数进行过验证），谢谢！

2008-08-04 15:46

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• 不缺顶尖医院、有 SARS 前车之鉴，为何武汉仍然每一步都走晚了？

楼主

ydxzluck

铁杆站友

37楼

继续请教：
1。塔板数高低与色谱峰形（主要指拖尾因子/对称因子）有关系吗？
2。按yuanhejunr 的说法，是不是可以理解为：在色谱方法制订时，只要精密度和分离度达到要求，其它参数的范围可以放宽呢？比如：拖尾因子超出一般要求范围，达到了1.2,是不是也可以呢？！

yuanhejun wrote:
中国药典2005版2部，通则色谱法项下HPLC法要求了四个参数，包括理论塔板数，分离度，拖尾因子，和精密性。其中特别要求精密性和分离度。理论塔板数和拖尾因子给分离度和精确性提供了必要的信息。
对于一个validated HPLC method来说，为了确认方法在使用时达到方法要求的良好的精密性，准确度和专属性等，要求使用者在应用该法时必须达到其系统适用性。所以，如果理论塔板数低于要求，那该法所得结果是不可信的。

2008-08-06 09:38

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• 武汉肺炎疫情发展到了最关键时刻，救全国只剩一招，错过正月初十就晚了！

楼主

ydxzluck

铁杆站友

38楼

关于“塔板数”的问题是我在做一糖类物质时发现的：

国家标准要求塔板数不低于2500，按其标准方法做，塔板数符合规定，但色谱峰前沿非常明显，可达0.8，峰形很差，色谱图没法看，更别说写申报资料了！
降低温度后，对称因子可达1.0，峰形对称，但塔板数却只有1500，达不到国家标准要求！不知该选择哪个条件？
试过菲罗门、安捷伦、资生堂的柱子，都是这种现象！

2008-08-06 09:39

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• 新型冠状病毒感染的肺炎防控方案(第二版)

yandj

铁杆站友

39楼

歇斯底里宝宝
研究中遇到问题，理论塔板数太低（不到2000），人家文献上要求6000，用的是C18柱，流动相为0.02mol/L庚烷磺酸钠（含0.1%三乙胺，磷酸调Ph值至3.45）：乙腈=35：65。换了好多柱子，理论塔板都低，有什么办法可提高其理论塔板数，谢谢！

哈哈，原来大家没看明白，是给“歇斯底里宝宝”回答的问题。所以只有他知道怎么回事了。
把美国药典的方法给您，只能做为参考，因为国产原料未做这样的要求。
Ratio of alkyl components—
Mobile phase— Adjust a 0.1Msolution of sodium acetate with glacial acetic acid to a pHof 5.0.Mix 55parts of this solution with 45parts of acetonitrile,filter,and degas.The acetonitrile concentration may be varied from 40parts to 60parts to meet system suitability requirements.
Standard solution— Dilute USP Benzalkonium Chloride RSwith water to obtain a solution having a known concentration of about 4mg per mL.
Test solution— Dissolve about 1g of Benzalkonium Chloride,accurately weighed,in water in a 50-mLvolumetric flask,dilute with water to volume,and mix.Pipet 5.0mLof this solution into a 25-mLvolumetric flask,dilute with water to volume,and mix.
Chromatographic system (see Chromatography á621ñ)— The liquid chromatograph is equipped with a 254-nm detector and a 3.9-mm ×30-cm column that contains packing L10.The flow rate is about 2mLper minute.Chromatograph the Standard solution,and record the peak areas as directed for Procedure:the resolution,R,between the C12and C14peaks is not less than 1.5;the column efficiency,determined from the C12peak,is not less than 1000theoretical plates;and the relative standard deviation for replicate injections is not more than 2.0%determined from the C12peak.
Procedure— Inject about 20µLof the Test solutioninto the chromatograph,record the chromatogram,and measure the peak areas.Identify the homolog peaks by comparison of the retention times with those from the Standard solution,similarly chromatographed.Calculate the percentage of each quaternary ammonium homolog taken by the formula:
100(A/B),
in which Ais the product of the area obtained from the homolog multiplied by its molecular weight;and Bis the sum of all of these products.The molecular weights of the C10,C12,C14,and C16homologs are 312,340,368,and 396,respectively.
Assay for total alkylbenzyldimethylammonium chlorides— Weigh accurately a quantity of Benzalkonium Chloride equivalent to about 500mg of anhydrous benzalkonium chloride,and transfer,with the aid of 35mLof water,to a glass-stoppered,250-mLconical separator containing 25mLof chloroform.Add 10.0mLof freshly prepared potassium iodide solution (1in 20),insert the stopper in the separator,shake,allow the layers to separate,and discard the chloroform layer.Wash the aqueous layer with three 10-mLportions of chloroform,and discard the washings.Transfer the aqueous layer to a glass-stoppered,250-mLconical flask,and rinse the separator with three 5-mLportions of water,adding the washings to the flask.Add 40mLof cold hydrochloric acid to the flask,mix,and titrate with 0.05Mpotassium iodate VSuntil the solution becomes light brown in color.Add 5mLof chloroform,insert the stopper into the flask,and shake vigorously.Continue the titration,dropwise,with shaking after each addition,until the chloroform layer becomes colorless and the aqueous layer is clear yellow.Perform a blank determination,using 20mLof water as the sample.The difference between the two titrations represents the amount of potassium iodate equivalent to the weight of benzalkonium chloride in the sample.Each mLof 0.05Mpotassium iodate is equivalent to x/10mg of benzalkonium chloride,where xrepresents the average molecular weight of the sample,derived by summing,for all homologs,the products
W(A/B),
where Wis the molecular weight of a given homolog,Ais the area of the peak produced by that homolog in the chromatogram from the Ratio of alkyl componentstest,and Bis the total peak area for all homologs in that chromatogram.

2008-08-06 09:56

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