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【讨论】HPLC理论塔板数对含量测定及有关物质测定的影响？ [精华]

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楼主

铁杆站友

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1楼

这个帖子发布于11年零201天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。

翻看药典时发现大多品种在“HPLC含量测定项下”都有类似“以。。。峰计，理论塔板数不得你于。。。”的说法，可各品种塔板数规定的差别很大，低的有七八百,高的有四五千,还有的没有规定塔板数!
请教各位:
1. 塔板数在"含量测定"项下规定，是不是代表塔板数高低会影响含量测定准确性？
2. 本人认为塔板数是柱效的一种体现，塔板数过低会影响杂质的分离度，因此其影响的应该主要是“有关物质”测定，而不是含量测定！不知这种理解是否正确？
3. 塔板数若比国家标准规定的低，在审评的时候是不是一定会有问题呀？
先想到这些，请各位战友说下自已的“塔板数”在实际工作中的理解！

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2008-07-14 10:53 浏览 : 21541 回复 : 79

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xiangjie_1984

生化室

丁香园荣誉版主

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49楼

3. 理论塔板数的计算：公式为：N=L/h L是色谱柱的柱长, h理论板高,N理论塔板数。比较理想的就是以半峰宽计算，当然也有用峰宽计算出来的。柱效高，那么峰宽相应的要窄一点，并且自然分离度要提高，那么峰面积是如何计算出来的呢？先是辨别每一个峰的开始及结束时间，并用“|“符号标记这些点，同时寻找这些峰的顶点，确定保留时间，建立基线，计算峰面积、峰高及峰宽，柱效如果低，那么色谱流出曲线自然不是正态发布，如何确认起点和终点自然精密度不高，因此，结论是柱效的数据对色谱峰的峰面积肯定有很大影响，应该修订进去，有关物质同理，，除了峰起止位置原因，另一个重要原因就是，柱效低时你可能会发现可能你的样品比柱效高时变“干净”了，主要表现丰靠后的小杂质峰（变平到你以为是基线起伏）以及靠主峰很近的小杂质（被主峰吞并了，这时即便测定含量也是不准确的）。而分离度的高低只能说明两个峰是否达到基线分离，至于主成分和杂质峰的定量计算还是要依据柱效这个重要参数来控制。
4. 理论塔板数的制定：一，规定的理论板数一般来说是一个极端的数据，一般是指低于这个规定的色谱柱在此条件下此品种中的检测就不能用了，以防有杂质不可检出，原因参见前面发言。但是，要明白一个问题，就是两根不同的色谱柱，同样条件试验时，不一定是3000的一定比2500得到的信息多（色谱柱保留行为不一定一样的）！但一般来讲，比如5000与6000可能就没有什么差别了。因此，在研究时，不妨使用高一些板数的色谱柱，确保此类问题不会出现。尤其是方法学确立时，不要使用低柱效的柱子。
二，何时确定理论塔数。一般来讲，这个只有统一标准时进行完通用性验证后制订才有意义。但对于自己研究时初订时，通常只有使用高柱效柱确定主峰旁有小峰时（主峰可不一定是最大峰，应该是研究谁，谁就是主峰，包括已知杂质），再使用同类型低柱效的柱子，看到多低的板数，基本达到无法分离的程度，那这个板数就可初定为最低要求的理论板数。当然，要订入标准还要经过通用性验证。

总结的不好，大家凑合看！

2008-09-18 20:50

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• 百年难遇的痛风结节

楼主

ydxzluck

铁杆站友

2楼

看到欧洲药典一原料药，也没有规定塔板数，而中国药典同一品种却做了规定！

2008-07-14 10:55

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• 愤怒！重医一教授竟然公开辱骂在家待命的研究生！

wuqing1

铁杆站友

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3楼

ydxzluck
翻看药典时发现大多品种在“HPLC含量测定项下”都有类似“以。。。峰计，理论塔板数不得你于。。。”的说法，可各品种塔板数规定的差别很大，低的有七八百,高的有四五千,还有的没有规定塔板数!
请教各位:
1. 塔板数在"含量测定"项下规定，是不是代表塔板数高低会影响含量测定准确性？

严格地讲塔板数越高含量越准确，但是影响是很小的！
主要是因为柱效越高可以提高分离度，有时用柱效低的柱子，有可能把两个性质相近的峰分不开，在色谱图中看着只是一个峰，但实际是两个峰重到一块！柱效高低对峰面积影响较小，主要是在积分时引起误差，柱效高的相对来说误差较小。

quote]ydxzluck wrote:
2. 本人认为塔板数是柱效的一种体现，塔板数过低会影响杂质的分离度，因此其影响的应该主要是“有关物质”测定，而不是含量测定！不知这种理解是否正确？
同意上面说法，柱效就是体现柱子对某物质的分离情况！
quote]ydxzluck wrote:
3. 塔板数若比国家标准规定的低，在审评的时候是不是一定会有问题呀？
先想到这些，请各位战友说下自已的“塔板数”在实际工作中的理解！

我觉得只要分离度、拖尾、对称性等符合要求，而塔板数比国家标准规定的低，在审评的时候应该不会有问题！
以上只是个人看法，不对之处，请大家指出、讨论共同学习！

2008-07-14 14:54

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