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蛋白质和糖学

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【专题讨论】2D PAGE 实例分析（2D Troubleshooting) 第二波：从样本制备到结果分析 [精华]

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楼主

丁香园准中级站友

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1楼

这个帖子发布于12年零197天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。

上一个专题“2D-PAGE实例分析（2D Troubleshooting) 和超强技术支持”在发出后得到了版主和战友们的支持，在大家的共同探讨中，对于2D其中的很多问题都有了很多新的认识。与此同时，我上次发的专题中所提到的实例很多都是局部，而没有全图，所以一些战友在分析自己的胶图结果的时候，无法很好的对号入座，所以才决定再推出这个“2D Trouble shooting 实例分析第二波：从样本制备到结果分析”。同样也是翻译自GE HEALTH的专家一次讲座的PPT，然后加上我自己的一些听后的感想和心得。

这个专题的重点在于通过大量完整的2D胶整图实例，在从样本制备的过程到结果分析中，不同的处理方式（如盐离子浓度，不同范围的IPG胶条，以及样品成分，试剂污染的影响）所造成的后果的比较，来说明我们实验中所需要注意的一些问题，并且能够更好的与实验中的一些不理想的2D胶对号入座，更快更好的找出需要改进的地方。

但是这个专题的目标并不是说2D有多么多么重要，因为现在对于蛋白质组学的研究，随着目标蛋白的特异性的逐渐增加，由于2D的局限性，其所占的比例已经越来越小，但是作为蛋白质组学的一个经典手段，这个专题如果能够帮助大家在2D上节约时间，从而更好的投入进一步的功能和通路分析中去，我的初衷也就达到了。

上次的专题我们是以一张漂亮的2D胶图开始的，这次我们就以一张“噩梦”开始吧，o(∩_∩)o...

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2008-07-07 08:40 浏览 : 18037 回复 : 90

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solonye 编辑于 2008-07-07 16:42

• 文献求助

楼主

丁香园准中级站友

2楼

一、样本制备过程

现象：氨甲酰化横向点系列（见下图）

原因：尿素中有杂质

解决：更换新的尿素或者通过强阳离子交换柱去除异氰酸盐，这个现象有时候在没有杂质的时候也有少量出现，但是不会像这种情况这么明显，但是也表现为一个蛋白质点在水平方向上的系列拖尾，经质谱鉴定都是同一蛋白。

2008-07-07 08:45

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solonye 编辑于 2008-07-07 10:18

• 儿童发热在基层医疗卫生机构的规范化诊治

楼主

丁香园准中级站友

3楼

现象：见下图

原因：三氯醋酸-丙酮沉淀所得到的沉淀仅仅用冷丙酮洗了，而三氯醋酸仍然残留在了沉淀中，从而影响了结果。

解决：使用90%的丙酮与10%的水配比来洗沉淀，三氯醋酸-丙酮沉淀是我们常常使用的一种纯化蛋白的方法，简单，有效，所以细节的注意就更为重要。

2008-07-07 08:52

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• 一天上报八次体温，真正有体温计的人有几个？

楼主

丁香园准中级站友

4楼

现象：见下图

分析：植物蛋白的粗提物杂质比较多，有一些非蛋白杂质或者糖基化蛋白，对于2D的分离极为不利，需要我们通过一些方法来提纯

2008-07-07 09:02

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solonye 编辑于 2008-07-07 09:22

• 死亡患者危重讨论怎么写？