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【讨论】小鼠神经干细胞培养的注意事项

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楼主

wh2008

丁香园中级站友

1楼

这个帖子发布于12年零331天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。

本人最近做了小鼠神经干细胞培养后，有以下问题进行讨论：
1. 取材部位的准确性对实验结果的影响？
2. 细胞培养液成份的选择不同对实验结果的影响？
3. 脑组织神经干细胞分离方法的不同对实验结果的影响？
4. 神经干细胞接种密度对实验结果的影响？
5. 从取材、分离、接种到传代等操作中无菌操作的实施情况？
6. 还有其它哪些关键内容？
....................欢迎大家积极讨论，谢谢参与。

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2008-05-29 17:25 浏览 : 11254 回复 : 37

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forem 编辑于 2008-05-29 17:32

• 微塑料成为病原体和抗药性细菌的“中心”

楼主

wh2008

丁香园中级站友

2楼

首先提供一种标准的培养方法，也就是Nature protocs上的方法（是我在dxy中发的一个帖子中的共享资源）：http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=156&id=11916378&sty=1。

2008-05-29 21:47

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• 这就是传说中的金枪不倒！！！

楼主

wh2008

丁香园中级站友

3楼

若大家英语不好，我再翻译成中文，以和大家密切交流，望大家积极讨论。具体见附件。

nature protoc 中文方法.doc(27.5k)

2008-05-29 21:51

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• 机器人辅助胰十二指肠切除术（无超声刀），主刀浙大一院白雪莉教授

楼主

wh2008

丁香园中级站友

+1 积分
4楼

NSC培养中常见问题：
1.污染原因：在解剖过程中使用未经消毒的器械和添加未消毒灭菌的成分到培养液中。如果开始种植的细胞密度很高，那么死细胞或濒死细胞会降低培养液的PH，从而抑制细胞生长。

2.神经球的冻存和复苏：
如果冷冻过程后神经球数量减少，那么减少种植孔的数目（开始种植4或2个孔）。也可以将神经球分散成单细胞再冷冻。

3.关键步骤（具体参照以上附件内的步骤）
分离大脑
步骤4
步骤17－脑膜（特别使软脑膜）和相连的血管是细胞污染的来源（血细胞，上皮细胞和成纤维细胞）。
步骤20

分散脑组织
步骤27

冻存和复苏
步骤8－将内容物缓慢加入到含有SFM的锥形管中
步骤9－复苏时，保证冷冻液全部倒出， DMSO会损伤细胞。

4. 神经球的大小和密度：
初始种植密度会影响孔内产生神经球的数量。随神经球增大，分散将会越来越困难，特别是直径超过200 µm时。直径小于100 µm的神经球比较容易分散成单细胞。

2008-05-29 21:58

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• 山东一乡镇卫生院院长荣获全国脱贫攻坚先进个人荣誉称号

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