更多

医药数据库

来问医生

登录注册

蛋白质和糖学

关注今日：17 | 主题：437294

论坛首页 > 蛋白质和糖学技术讨论版 > 蛋白质技术讨论

发帖
每发1个新帖
可以获得0.5个丁当奖励
回帖

【求助】如何在分离纯化中保护蛋白质的游离巯基？

只看楼主
页码直达：
直达末页

楼主

丁香园准中级站友

1楼

这个帖子发布于12年零197天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。

我的蛋白上有一个Cys，本来这个蛋白很好纯化的，但很不幸的是纯化获得

的蛋白跑非还原电泳竟有两条带，二聚体带占了很大部分。我的这个游离

巯基还是很重要的，怎样才能在纯化的过程中避免两个分子间的巯基形成二

硫键的呢？谢谢！

我已经试过加巯基乙醇，效果有限，而且我的蛋白理论上不应该加巯基乙醇

或是DTT的。望有经验的兄弟指点迷津。

邀请讨论

搜索

2008-03-16 22:36 浏览 : 2754 回复 : 6

投票
收藏 2
打赏
引用
分享
- 微信扫一扫
- 新浪微博
- 丁香客
- 复制网址
举报
- 广告宣传推广
- 政治敏感、违法虚假信息
- 恶意灌水、重复发帖
- 违规侵权、站友争执
- 附件异常、链接失效
- 其他

• 2020执业医成绩要等28号了

丁香园准中级站友

+1 积分
2楼

游离的Cys成双键的控制方法一般是选择还原性的条件，如果不宜加还原试剂的话可以采用以下方法加以控制：
1.流动向脱气后使用，以免流动相内的氧气氧化；2.降低纯化过程的温度，减慢成双键的反应速度；3.调节流动相的pH值，让成键反应的化学平衡向打开双键的方向移动。

2008-04-01 10:34

投票 1
收藏 2
打赏
引用
分享
- 微信扫一扫
- 新浪微博
- 丁香客
- 复制网址
举报
- 广告宣传推广
- 政治敏感、违法虚假信息
- 恶意灌水、重复发帖
- 违规侵权、站友争执
- 附件异常、链接失效
- 其他

• VSD+清创治疗疝无张力修补后切口感染1例

铁杆站友

3楼

添加游离的cysteine 3mM

2008-04-01 10:46

投票
收藏
打赏
引用
分享
- 微信扫一扫
- 新浪微博
- 丁香客
- 复制网址
举报
- 广告宣传推广
- 政治敏感、违法虚假信息
- 恶意灌水、重复发帖
- 违规侵权、站友争执
- 附件异常、链接失效
- 其他

• 深圳两医生重复使用耗材，多收患者600万，判刑20个月

丁香园准中级站友

4楼

-SH常用的保护剂有苄基和对甲氧苄基，苄基可以用Na-液NH3去除，对甲氧苄基在液态氟化氢中于0度处理30分钟去除，碘乙酰胺和碘乙酸也能保护，但这些保护剂的去除可能很麻烦！就查到这些，不知道对你是否有用！

2008-04-01 12:33

投票
收藏 1
打赏
引用
分享
- 微信扫一扫
- 新浪微博
- 丁香客
- 复制网址
举报
- 广告宣传推广
- 政治敏感、违法虚假信息
- 恶意灌水、重复发帖
- 违规侵权、站友争执
- 附件异常、链接失效
- 其他

• 安徽某县医院儿科医护人员，以科室名义联名要求全部转岗