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蛋白质和糖学

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包涵体的洗涤问题

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楼主 lissazhang06
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这个帖子发布于16年零307天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
请教各位大侠:我原核表达所得的包涵体无论用什么方法洗涤都无法除去杂蛋白,我是用洗过的和未洗的同时电泳,染色后发现没有一点差异,真是气死了。
还望各位高手不吝赐教!多谢!!!
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2004-03-30 11:00 浏览 : 4079 回复 : 7
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通常的洗涤方法一般是洗不干净的,我以前是这么做的,先把包涵体用6M盐酸胍溶解充分,过滤除去未溶解的物质,注意留样跑电泳,然后用水稀释到4M,离心把沉淀和上清分别跑电泳,如此类推可以一直稀释到合适的浓度,你可以找到一个合适去除杂质的办法,其实这就是梯度沉淀的方法,我觉得比通常的直接洗脱效果好。
2004-03-30 11:30
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dynamo_lee
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包含体一般经过0.1%Triton x-100,0.02%脱氧胆酸钠,1mM EDTA, 2M尿素,每种溶液里面加0.5M NaCL

你可以摸索一个洗涤组合,看哪种洗涤的效果最好。
2004-03-30 13:16
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楼主 lissazhang06
lissazhang06
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4M的尿素我都试过,可是那些杂蛋白仍然无动于衷,呵呵,太顽固了。我的原核表达量不是很高,而我们同实验室的一个表达量很高,杂蛋白就很少,这两者是不是成反比的啊?
2004-03-30 14:48
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