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有人用pGEX质粒载体表达外源蛋白的么?

最后编辑于 2022-10-09 · IP 辽宁辽宁
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这个帖子发布于 21 年零 205 天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。

我把空质粒pGEX-4T-2转化到BL21(DE3)中后,接一单菌落至3mlLB中,摇过夜饱和,次日按1:100接100mlLB中37度250转/分摇3小时后加入IPTG诱导,再摇4小时后3500转/分沉淀菌体,将菌体用6毫升蒸馏水悬浮后超声破碎菌体,然后10000转离心,再取上清和沉淀跑SDS-PAGE电泳,结果发现GST大部分在沉淀中,而我想如果用此质粒表达我的蛋白(以可溶性形式表达),那不是也在沉淀中么?哪位用过此质粒可溶性表达外源蛋白,你的GST是大部分在沉淀中的么?是否空质粒的GST就是在沉淀中?还是我的操作有问题?

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