3'-RACE的困惑
前段时间,我通过蛋白质的N-末端设计简并引物,想通过3'-RACE扩增3'-端cDNA序列,最初我通过温度梯度筛选退火温度为62-65度有1K左右的片段出现,但测序结果表明都不是我需要的片段,今天做的时候,RT以后,我作了一个不加简并引物的对照,结果发现即使不加简并引物也同样能扩增出DNA片段,这个实验结果太难让我接受了,毕竟我在RACE上已经花了很多时间,为什么会出现这个结果,我下一步该怎么办?请大家多多指教!
最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 2733
前段时间,我通过蛋白质的N-末端设计简并引物,想通过3'-RACE扩增3'-端cDNA序列,最初我通过温度梯度筛选退火温度为62-65度有1K左右的片段出现,但测序结果表明都不是我需要的片段,今天做的时候,RT以后,我作了一个不加简并引物的对照,结果发现即使不加简并引物也同样能扩增出DNA片段,这个实验结果太难让我接受了,毕竟我在RACE上已经花了很多时间,为什么会出现这个结果,我下一步该怎么办?请大家多多指教!
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