请教2D电泳的问题？
这个帖子发布于 21 年零 114 天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
我是做双向电泳的新手，实验中遇到些问题，希望请教大家，还有发一张2D图谱，希望大家能够帮我分析问题，谢谢！
我第一向用的是BIO－RAD的垂直电泳槽，胶条8cm长，直径1mm
裂解液 50mM Tris8M 尿素，1％DTT，2％两性电解质，2％NP－40，2M的硫脲，脑组织匀浆后，离心取上清。
IEF胶条 4％Arc/Bis，8M 尿素，2％NP－40，2％两性电解质
上样量17ul样品
电泳条件：预电泳 200V 30min
300v 30min
400v 30min
电泳 400V 30min
500V 5hr
平衡条件 1％DTT，62.5mMTris（pH8.8），2％SDS，10%甘油，40min
SDS电泳 恒流20mA，5h
问题：1. 等电聚焦Vh多少较好？
2. 平衡时间是否过长？
3. SDS电泳时，溴酚篮90min后就跑出了胶条，但这个时候染色，只有胶上1/3处有点，请问合适的电泳时间和其它的参数？
4. 我做的图谱上，蛋白为什么不成点？而且蛋白点少，是不是上样量小。
我第一向用的是BIO－RAD的垂直电泳槽，胶条8cm长，直径1mm
裂解液 50mM Tris8M 尿素，1％DTT，2％两性电解质，2％NP－40，2M的硫脲，脑组织匀浆后，离心取上清。
IEF胶条 4％Arc/Bis，8M 尿素，2％NP－40，2％两性电解质
上样量17ul样品
电泳条件：预电泳 200V 30min
300v 30min
400v 30min
电泳 400V 30min
500V 5hr
平衡条件 1％DTT，62.5mMTris（pH8.8），2％SDS，10%甘油，40min
SDS电泳 恒流20mA，5h
问题：1. 等电聚焦Vh多少较好？
2. 平衡时间是否过长？
3. SDS电泳时，溴酚篮90min后就跑出了胶条，但这个时候染色，只有胶上1/3处有点，请问合适的电泳时间和其它的参数？
4. 我做的图谱上，蛋白为什么不成点？而且蛋白点少，是不是上样量小。
4 1 点赞
