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细胞技术

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【求助】关于使用CFSE的一些问题

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楼主 sandra8015
sandra8015
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这个帖子发布于13年零95天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
正尝试用cfse检测细胞增殖，许多问题不太明白，求各位多多帮忙啊！
1，用cfse标记时，细胞悬液的浓度一般应为多少呢，应该用什么悬呢，PBS，or完全培养液呢，有什么关系吗？
2，标记完毕后，怎样Quench the staining呢？单纯的洗可以吗？还是必需用高血清的东西呢？原理又是什么呢？

哪位能好心提供详细的protocol呢？
谢谢大家了
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    换一换
2006-10-21 23:08 浏览 : 3537 回复 : 8
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楼主 sandra8015
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  • 2楼
再次请求大家帮帮忙啊
2006-10-22 23:14
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昨日确有一位好心的战友给予了回复，可后来没有了，能否麻烦您再发一边呢？谢谢！
2006-10-23 10:12
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lwjssry
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现在在宿舍,相关资料不在身边,先把我记得的写给你看看:
1.用cfse染色时,应用含BSA的PBS重悬,主要是培养液中的一些成分特别是血清成分会使cfse灭活.
2.染色时cfse浓度推荐1-5uM,浓度太高有可能影响细胞生存,太低染色效率低.当然实际情况要自己摸索,可以设一个浓度梯度,看看在哪个浓度下既不影响细胞生存而染色效果最好.做梯度时,范围可以更大一些
3.cfse浓度是实验成功的关键,也是最需要摸索的条件,一定要重视
4.染色10分钟后,弃去PBS,用PBS洗一下,再加入完全培养基,在培养箱中放5-10min,使未进入细胞的cfse失活.弃去培养液,再重新加入培养.有条件的话可以多洗几次.
5.实际上很难做出典型的很多峰,代与代差别明显的图.
2006-10-24 23:27
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